|
|
| Κωδικός Πόρου |
000397196 |
| Τίτλος |
Βιοχημικός και βιοφυσικός χαρακτηρισμός των διακριτών δομικών περιοχών της πιθανής απακετυλάσης πολυσακχαρίτων BAO330 από Bacillus anthracis |
| Άλλος τίτλος |
Biochemical and biophysical chracterization of the sturctural domains of the putative polycaccharide deacetylases BAO330 from Bacillus anthracis. |
|
Συγγραφέας
|
Μακράκη, Ελένη Κ.
|
|
Σύμβουλος διατριβής
|
Μπουριώτης, Βασίλης
|
| Περίληψη |
Η λιποπρωτεΐνη ΒΑ0330 αποτελεί μια από τις 11 πιθανές απακετυλάσες πολυσακχαριτών του Bacillus anthracis. Πρόσφατα απεδείχθη ο δομικός της ρόλος στη σταθεροποίηση του κυτταρικού τοιχώματος του βακτηρίου. Η ΒΑ0330 αλληλεπιδρά με πεπτιδογλυκάνη και συμβάλλει σημαντικά στη προσαρμογή του βακτηρίου σε συνθήκες υψηλής αλατότητας. Η επίλυση της δομής της αποκάλυψε μια καρβοξυτελική περιοχή που φέρει τη τυπική αναδίπλωση πρωτεϊνών της ομάδας CE4 (NodB) και μια αμινοτελική περιοχή που δομικά μοιάζει με την επικράτεια φιμπρονεκτίνης τύπου-3. Μέχρι σήμερα δεν έχει ανιχνευτεί ενεργότητα της ΒΑ0330 σε συνήθη υποστρώματα απακετυλασών πολυσακχαριτών.
Ο βιοχημικός και βιοφυσικός χαρακτηρισμός αυτών των διακριτών δομικών περιοχών της ΒΑ0330 αποτέλεσε το αντικείμενο μελέτης της συγκεκριμένης εργασίας. Πραγματοποιήθηκε έκφραση των επιμέρους αυτών δομικών περιοχών ΒΑ0330(FN3) και BA0330(NODB) στο ετερογενές σύστημα έκφρασης της Ε.coli και απομόνωση της διαλυτής επικράτειας BA0330(FN3) σε δύο χρωματογραφικά στάδια (προσροφητής «Ni-NTA agarose», προσροφητής Sephacryl S100).
Συνοψίζοντας τα αποτελέσματα της παρούσας διατριβής η επικράτεια φιμπρονεκτίνης τύπου-3, BA0330(FN3), έπειτα από χρήση της μεθόδου του κυκλικού διχρωισμού (CD), φαίνεται να παρουσιάζει υψηλό σημείο τήξης και μια εντελώς αναστρέψιμη μορφή μετά από θέρμανση στους 90οC και εν συνεχεία ψύξη πίσω στους 10οC, ενω παράλληλα διατηρεί υψηλό το ποσοστό των β-φύλλων στη δευτεροταγή της δομή, σημαντική ένδειξη ανεξάρτητης αναδίπλωσής της από την υπόλοιπη αλληλουχία της ΒΑ0330. Αρχικά πειράματα, δείχνουν αλληλεπίδραση της ΒΑ0330(FN3) με την πεπτιδογλυκάνη καθιστώντας υπεύθυνη τη συγκεκριμένη επικράτεια για την αλληλεπίδραση της ΒΑ0330 με το ίδιο υπόστρωμα. Η ανάλυση της ΒΑ0330 με σκέδασης φωτός πολλαπλών γωνιών (Multi-angle light scattering, MALS) έδειξε τη διατήρησή της σε ένα μοναδιαίο πληθυσμό μονομερούς χωρίς να αποδεικνύεται καμία επίδραση της ιοντικής ισχύς στο πρότυπο ολιγομερισμού.
Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας παρέχουν σημαντικές πληροφορίες σχετικά με το ρόλο της επικράτειας φιμπρονεκτίνης τύπου-3 στη λειτουργία της ΒΑ0330 συμβάλλοντας στη διαλεύκανση της λειτουργίας της για την περαιτέρω κατανόηση της παθοφυσιολογίας του παθογόνου βακτηρίου Bacillus anthracis.
|
| Φυσική περιγραφή |
64 φύλλα : πίν., εικ. (μερ. έγχ.) ; 30 εκ. |
| Γλώσσα |
Ελληνικά |
| Θέμα |
FN3 |
|
Fibronectin type-3 |
|
Φιμπρονεκτίνη τύπου-3 |
| Ημερομηνία έκδοσης |
2015-11-20 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Εμφανίσεις |
282 |
Βιοχημικός και βιοφυσικός χαρακτηρισμός των διακριτών δομικών περιοχών της πιθανής απακετυλάσης πολυσακχαρίτων BAO330 από Bacillus anthracis
