Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Ανάπτυξη στρατηγικών πολλαπλή ιϊκή ανθεκτικότητα φυτών καπνού  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου uch.biology.msc//2003trantas
Τίτλος Ανάπτυξη στρατηγικών πολλαπλή ιϊκή ανθεκτικότητα φυτών καπνού
Συγγραφέας Τραντάς, Μάνος
Περίληψη Στα φυτά η τεχνική της έκφρασης διπλόκλωνων μορίων RNA, τα οποία προκαλούν την σίγηση ομόλογων RNA (RNA silencing), μπορεί να χρησιμοποιηθεί αποτελεσματικά για την καταστολή οποιουδήποτε γονιδίου στόχου. Η επιτυχία της τεχνικής αυτής στηρίζεται στον κατακερματισμό των διπλόκλωνων RNA με τη βοήθεια του DICER-LIKE ενζύμου και την καταστολή στη συνέχεια των ομόλογων RNA στόχων με τη δράση του RNA-Inducing Gene Silencing συμπλόκου (RISC). Στον αγρό, τα φυτά ξενιστές μπορούν δυνητικά να μολυνθούν από πολλούς ιούς ταυτόχρονα, προκαλώντας πολύ σημαντική ζημιά στην παραγωγή. Σκοπός μας είναι να δημιουργήσουμε σειρές μετασχηματισμένων καπνών που είναι ταυτόχρονα ανθεκτικές σε τρεις διαφορετικούς ιούς: στον ιό του κηλιδωτού μαρασμού της τομάτας (tomato spotted wilt tospovirus ή TSWV), στον ιό του μωσαϊκού της αγγουριάς (cucumber mosaic cucumovirus ή CMV) και στον ιό της πατάτας Υ (potato virus Y ή PVY). Για την επίτευξη του στόχου αυτού ακολουθήσαμε δυο πειραματικές στρατηγικές. Κατά την πρώτη, τμήματα από κάθε ιό, που είναι συντηρημένα στην αλληλουχία τους, κλωνοποιήθηκαν σε ανεξάρτητους φορείς. Αυτοί οι cDNA κλώνοι ενώθηκαν και υποκλωνοποιήθηκαν σε φορέα μπροστά από cDNA που κωδικοποιεί για το ιντρόνιο 2 της α-υπομονάδας της γλουταμινικής αφυδρογονάσης (GDH) του Vitis vinifera. Μια δεύτερη αλληλουχία των τριών ενωμένων ιικών cDNA υποκλωνοποιήθηκε από την άλλη μεριά του ιντρονίου, σχηματίζοντας έτσι κατασκευή με ανάστροφες αλληλουχίες (inverted repeats). Η κατασκευή αυτή τέθηκε κάτω από τον έλεγχο του υποκινητή CaMV 35S. Μετά την μεταγραφή και το μάτισμα του RNA δημιουργείται ένα διπλόκλωνο μόριο με ομόλογα προς τον κάθε ιό τμήματα. Κατά την δεύτερη στρατηγική έγινε προσπάθεια απλοποίησης της τεχνικής κάνοντας χρήση συνθετικών ολιγονουκλεοτιδίων, που αποτελούν τμήματα των προαναφερθέντων ιών, αντί για την χρήση κλωνοποιημένων ιικών περιοχών. Η κατασκευή ακολούθησε την ίδια πορεία με την πρώτη στρατηγική. Η χρήση ολιγονουκλεοτιδίων έχει το πλεονέκτημα ότι απαιτεί μόνο τη γνώση των ιικών αλληλουχιών. Και οι δυο κατασκευές χρησιμοποιήθηκαν για τον μετασχηματισμό φυτών καπνού. Επιπλέον έγινε προσπάθεια για την δημιουργία διαγονιδιακών φυτών χωρίς την παρουσία του γονιδίου της ανθεκτικότητας στην καναμυκίνη, με την συγκαλλιέργεια φυλλικών δίσκων με δυο διαφορετικά είδη αγροβακτηριδίου. Το ένα είδος περιέχει το δυαδικό φορέα pART27 με την κατασκευή για την ανθεκτικότητα στους ιούς χωρίς το γονίδιο ανθεκτικότητας στην καναμυκίνη και το άλλο περιέχει το pART27 μόνο με το γονίδιο της ανθεκτικότητας στην καναμυκίνη. Συγκαλλιεργόντας τους φυλλικούς δίσκους με τα δυο αυτά αγροβακτηρίδια, θεωρητικά μπορεί να έχουμε είσοδο των δυο T-DNA σε δυο διαφορετικούς γενετικούς τόπους και έτσι αργότερα με διάσχιση να διαχωρίσουμε το γονίδιο ανθεκτικότητας στους ιούς από αυτό της ανθεκτικότητας στο αντιβιοτικό και να έχουμε απογόνους ανθεκτικούς μόνο στους ιούς.
Ημερομηνία έκδοσης 2003-11-01
Ημερομηνία διάθεσης 2004-01-19
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 24

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 0