| Περίληψη |
Ο Τetranychus urticae και το κουνούπι Anopheles gambiae αποτελούν μείζονα επιβλαβή αρθρόποδα για τα καλλιεργούμενα φυτά και τη δημόσια υγεία. Ο έλεγχος τους βασίζεται κατά κύριο λόγο στη χρήση εντομοκτόνων με αποτέλεσμα τα παράσιτα αυτά να έχουν αναπτύξει υψηλά επίπεδα ανθεκτικότητας. Η αποσαφήνιση των μηχανισμών αποτοξικοποίησης αποτελεί αναγκαία προϋπόθεση για τη διαχείριση και την αντιμετώπιση του φαινομένου.
Στο πρώτο μέρος αυτής της εργασίας ασχοληθήκαμε με τη λειτουργική έκφραση δυο πρωτεϊνών του T. urticae που ενδέχεται να σχετίζονται με την ανθεκτικότητα που εμφανίζει το ακάρεο σε ποικίλες τοξικές χημικές ουσίες: τη πρωτεΐνη Cyanate lyase και τη CYP392A11. Η επιλογή των προαναφερθέντων πρωτεϊνών δεν έγινε τυχαία. Αναλυτικότερα, με την ολοκλήρωση του προγράμματος αλληλούχισης του γονιδιώματος του τετράνυχου, εντοπίστηκαν μερικά γονίδια που προέρχονται από τα βακτήρια. Ένα από αυτά τα γονίδια ήταν και η πρωτεΐνη Cyanate lyase η οποία φαίνεται να εμπλέκεται στην ικανότητα του παράσιτου να τρέφεται με κυανογόνα φυτά. Επιπλέον, πειράματα ανάλυσης μικροσυστοιχιών DNA έδειξαν πως το γονίδιο Cyp392α11 υπερεκφράζεται σε ανθεκτικά στελέχη T. urticae, κατόπιν συγκρίσεως αυτών με κάποιο ευαίσθητο στέλεχος. Έτσι, αφού κλωνοποιήσαμε σε κατάλληλους φορείς έκφρασης πρωτεϊνών τα γονίδια cyanate lyase και cyp392a11, εκφράσαμε τις ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες και αποδείξαμε ότι πρόκειται για δύο ενεργά ένζυμα που εκφράζονται στην λειτουργική τους δομή στα κύτταρα του T.urticae. Η αποσαφήνιση του ρόλου των υπό μελέτη ενζύμων θα αποτελέσει αντικείμενο μελέτης σε μελλοντικές εργασίες.
Παράλληλα, στο δεύτερο μέρος της παρούσας εργασίας, προσπαθήσαμε να εντοπίσουμε τους ιστούς και τα κύτταρα που εκφράζονται τρείς πρωτεΐνες της βιοχημικής ανθεκτικότητας, οι CYP6Z2 – CPR – GSTE2, σε τομές από θηλυκά κουνούπια του είδους Anopheles gambiae. Πιο συγκεκριμένα, αφού απομονώσαμε το μεσέντερο, τα μαλπιγγιανά σωληνάρια και το carcass των κουνουπιών, δηλαδή τους βασικούς μεταβολικούς ιστούς, εφαρμόσαμε τη μέθοδο της ανοσοϊστοχημείας και βρήκαμε πως οι πρωτεΐνες – στόχοι εκφράζονται σε δομές και των τριών ιστών, γεγονός που επαληθεύει την εμπλοκή των υπό μελέτη ενζύμων στην αποτοξικοποίηση του Anopheles gambiae. Το επόμενο βήμα είναι η αποσαφήνιση του μηχανισμού με τον οποίο οι πρωτεΐνες CYP6Z2 , CPR και GSTE2 επάγουν την αποτοξικοποίηση του εντόμου και οδηγούν στην ανθεκτικότητα.
|
Λειτουργική έκφραση και ιστικοειδικός εντοπισμός πρωτεινών που συμμετέχουν στους μηχανισμούς αποτοξικοποίησης των εντόμων
