|
|
| Κωδικός Πόρου |
000342009 |
| Τίτλος |
Δημιουργία ανασυνδυασμένων αδενοϊών που εκφράζουν τις απολιποπρωτεiνες A-IV και A-II |
| Άλλος τίτλος |
Construction of recombinant adenoviruses expressing the apolipoproteins A-IV and AII |
|
Συγγραφέας
|
Τζαβλάκη, Καλλιόπη
|
|
Σύμβουλος διατριβής
|
Καρδάσης, Δημήτρης
|
| Περίληψη |
Οι απολιποπρωτεΐνες είναι δομικά συστατικά των λιποπρωτεΐνών. Ένα κοινό χαρακτηριστικό της πλεονότητας των απολιποπρωτεϊνών η παρουσία αμφιπαθικών α-ελίκων στη δευτεροταγή δομή τους. Οι αμφιπαθικές αυτές έλικες είναι σημαντικές για την ικανότητα των απολιποπρωτεϊνών να δεσμεύουν λιπίδια. Πέρα όμως από αυτή την ιδιότητα, κάθε απολιποπρωτεΐνη φέρει και κάποια μοναδικά χαρακτηριστικά ώστε να συμμετέχει ενεργά σε διάφορα βήματα των μονοπατιών σύνθεσης και καταβολισμού λιποπρωτεϊνών.
Όλα τα παραπάνω χαρακτηριστικά κάνουν επιτακτική την ανάγκη μελέτης των απολιποπρωτεϊνών τόσο in vitro όσο και in vivo. Ενώ η απολιποπρωτεΐνη Α-Ι η οποία αποτελεί βασικό δομικό συστατικό των λιποπρωτεϊνών υψηλής πυκνότητας (HDL) έχει μελετηθεί εκτενώς όσον αφορά τη δράση της στο μονοπάτι σχηματισμού της HDL, οι απολιποπρωτεΐνες Α-ΙV και Α-ΙΙ οι οποίες επίσης αποτελούν σε σημαντικό ποσοστό δομικά συστατικά των λιποπρωτεϊνών υψηλής πυκνότητας. Οι συγκεκριμένες απολιποπρωτεΐνες δεν έχουν διερευνηθεί πλήρως και η μελέτη της δράσης τους περιορίζεται κυρίως σε in vitro προσεγγίσεις μέχρι στιγμής.
Στο πρώτο μέρος, η παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή είχε ως στόχο τη δημιουργία ανασυνδυασμένων αδενοϊών που θα εκφράζουν τις απολιποπρωτεΐνες Α-ΙΙ και A-IV. Οι συγκεκριμένοι αδενοϊοί στη συνέχεια θα χρησιμοποιηθούν για την in vivo και in vitro μελέτη της δράσης των απολιποπρωτεϊνών αυτών σε πειραματόζωα. Από αυτές τις μελέτες αναμένεται να αποσαφηνιστεί ο τρόπος δράσης των συγκεκριμένων απολιποπρωτεϊνών in vivo.
Στο δεύτερο μέρος, σημαντικός στόχος αυτής της μεταπτυχιακής διατριβής ήταν η δημιουργία μιας μορφής της απολιποπρωτεΐνης Α-Ι που να μπορεί να βιοτινυλιωθεί με απώτερο στόχο την ευκολότερη απομόνωση της HDL από το ποντίκι. Καθώς η apoA-I αποτελεί μία εκκρινόμενη πρωτεΐνη, για την επίτευξη του παραπάνω στόχου καθοριστικής σημασίας ήταν η δημιουργία μιας μορφής της apoA-I που έφερε τον επίτοπο Bio καθώς και μιας εκκρινόμενης μορφής της λιγάσης της βιοτίνης BirA, η οποία έχει την ιδιότητα να βιοτινυλιώνει πρωτεΐνες που φέρουν τον επίτοπο Bio. H συνέκφραση της εκκρινόμενης BirA και της Βio-apoA-I σε κύτταρα της σειράς HEK 293T οδήγησε τελικά στην βιοτινυλίωση της apoA-I. Μελλοντικά θα κατασκευαστoύν αδενοϊοί που θα εκφράζουν την συγκεκριμένη μορφή της apoA-I που μπορεί να βιοτινυλιωθεί από την BirA και την εκκρινόμενη μορφή της BirA. Η μόλυνση ποντικών με τους συγκεκριμένους αδενοϊούς θα επιτρέψει το σχηματισμό HDL σωματιδίων στο πλάσμα που θα περιέχουν την βιοτινυλιωμένη μορφή της apoA-I.
Η μέθοδος αυτή θα επιτρέψει την ευκολότερη απομόνωση της HDL από το πλάσμα των μολυσμένων ποντικών χρησιμοποιώντας χρωματογραφία συγγένειας και πιο συγκεκριμένα χρησιμοποιώντας σφαιρίδια στρεπταβιδίνης-σεφαρόζης τα οποία προσδένουν βιοτίνη με μεγάλη συγγένεια και εξειδίκευση. Ο απώτερος στόχος είναι η μελέτη της δομής και της σύστασης της HDL που σχηματίζεται από μεταλλαγμένες μορφές πρωτεϊνών που συμμετέχουν στην βιογένεση και τον μεταβολισμό της όπως οι απολιποπρωτεΐνες A-I, A-II A-IV και Ε, και τα ένζυμα του πλάσματος όπως η LCAT, η CETP και άλλα.
Πολυάριθμες επιδημιολογικές μελέτες έχουν αποδείξει ότι τα χαμηλά επίπεδα της HDL στο πλάσμα αποτελούν έναν ανεξάρτητο παράγοντα κινδύνου για την ανάπτυξη της αθηρωμάτωσης. Κατανοώντας τη σχέση μεταξύ δομής και λειτουργίας της HDL μέσω της μελέτης των πρωτεϊνών που συμμετέχουν στον σχηματισμό της θα κατορθώσουμε να αναπτύξουμε νέες στρατηγικές για τη θεραπεία των δυσλιπιδαιμιών του ανθρώπου που χαρακτηρίζονται από τη μη λειτουργική HDL.
|
| Φυσική περιγραφή |
79 σ. : εικ. ; 30 εκ. |
| Γλώσσα |
Ελληνικά |
| Θέμα |
Apolipoproteins |
|
Lipoproteins |
|
Recombinant adenoviruses |
|
Λιποπρωτεΐνες |
| Ημερομηνία έκδοσης |
2009-04-07 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Σημειώσεις |
Διατμηματικό Μεταπτυχιακό Πρόγραμμα " Μοριακή Βιολογία και Βιοΐατρική"Ορκίστηκε στην Ιατρική |
| Εμφανίσεις |
345 |
Δημιουργία ανασυνδυασμένων αδενοϊών που εκφράζουν τις απολιποπρωτεiνες A-IV και A-II
