| Περίληψη |
Η σηματοδότηση Νotch είναι ένας εξελικτικά συντηρημένος μηχανισμός που καθορίζει την κυτταρική τύχη κατά την ανάπτυξη πολλών ιστών. Η ενεργοποίηση της σηματοδότησης ξεκινά με την αλληλεπίδραση του διαμεμβρανικού υποδοχέα Νotch με τους προσδέτες Delta και Serrate του γειτονικού κυττάρου, επίσης διαμεμβρανικές πρωτεΐνες. Προηγούμενα πειράματα έχουν δείξει ότι η ουβικουϊτινυλίωση των προσδετών και η επακόλουθη ενδοκυττάρωση τους είναι απαραίτητη για την αποστολή του σήματος Νotch. Όμως, δεν είναι γνωστό με ποιο τρόπο η ενδοκυττάρωση των προσδετών εξυπηρετεί την σηματοδότηση. Στην παρούσα εργασία εξετάσαμε με γενετικές μεθόδους ποιοι πρωτεϊνικοί παράγοντες, γνωστοί για την συμμετοχή τους στα αρχικά στάδια του μηχανισμού ενδοκυττάρωσης, χρειάζονται για την αποστολή σήματος από το Delta. Από τους παράγοντες που εξετάστηκαν, η Αμφιφυσίνη και το Disabled δεν είναι απαραίτητοι για την αποστολή σήματος. Η πρωτεΐνη Eps15 φαίνεται επίσης να μην απαιτείται για την σηματοδότηση, αν και υπάρχει αμφιβολία αν το μεταλλαγμένο αλληλόμορφο που χρησιμοποιήθηκε είναι πλήρως ανενεργό, ενώ για την κλαθρίνη και την α-Ανταπτίνη δεν μπορέσαμε να φτάσουμε σε κάποιο αποτέλεσμα, καθώς οι μεταλλαγές τους παρουσιάζουν φαινότυπο κυτταρικής θνησιμότητας. Επίσης, η πρωτεόλυση της ενδοκυτταρικής περιοχής του Delta από την Πρεσενιλίνη δεν χρειάζεται για την αποστολή του σήματος και ελέγχεται αν η πρωτεόλυση του εξωκυττάριου τμήματος του Delta από το Kuzbanian θα έχει το ίδιο αποτέλεσμα. Τέλος, δημιουργήσαμε στελέχη μυγών στα οποία το ενδοκυττωτικό μονοπάτι σημαίνεται από μια GFP-ουβικουϊτίνη χιμαιρική πρωτεΐνη, και που στη συνέχεια θα χρησιμοποιηθούν για να παρατηρηθεί η ενδοκυττωτική πορεία που ακολουθεί το Delta μέσα στο κύτταρο.
|
Γενετική ανάλυση ενδοκυττωτικών γονιδίων στην σηματοδότηση Notch της D.melanogaster
