|
|
| Κωδικός Πόρου |
000419739 |
| Τίτλος |
Large scale expression and purification of a high fidelityCas9 nuclease |
| Άλλος τίτλος |
Έκφραση και καθαρισμός σε μεγάλη κλίμακα μιας Cas9 νουκλεάσης υψηλής πιστότητας |
|
Συγγραφέας
|
Κεφάλα, Ιωάννα-Μαρία Δ.
|
|
Σύμβουλος διατριβής
|
Κουτσιούλης, Δημήτριος
|
|
Μέλος κριτικής επιτροπής
|
Κοκκινίδης, Μιχαήλ
Μπουριώτης, Βασίλης
|
| Περίληψη |
Η τεχνολογία της CRISPRCas9 αποτελεί πλέον το πιο διαφωτιστικό εργαλείο για την επεξεργασία του γονιδιώματος σε σύγκριση με τα υπάρχοντα συστήματα (ZFNs, TALENs). Αρχικά αναγνωρίστηκε ως σύστημα βακτηριακής ανοσίας. Η λειτουργία του βασίζεται στη συνεργασία μιας νουκλεάσης (Cas9) η οποία εισάγει θραύσεις στη διπλή έλικα του DNA και σε ένα μόριο gRNA. Η αποφυγή χρήσης πρωτεϊνικής μηχανικής και το εύκολα διαχειρίσιμο μόριο gRNA έδωσαν στους επιστήμονες τη δυνατότητα να στοχεύσουν οποιαδήποτε πιθανή θέση στο γονιδίωμα και να καταστήσουν αυτό το σύστημα τον πιο αποτελεσματικό, απλό και ακριβή τρόπο παρέμβασης στη γενετική πληροφορία. Την τελευταία δεκαετία αυτή η ανακάλυψη προέκυψε ξαφνικά για να “ταράξει τα νερά” του επιστημονικού χώρου και να χρησιμοποιηθεί σε ένα τεράστιο φάσμα εφαρμογών.
Η εκτεταμένη χρήση του συστήματος έχει προσελκύσει το ενδιαφέρον για περισσότερη επιστημονική έρευνα προκειμένου να καταστεί το σύστημα ακόμη πιο αποτελεσματικό και να ξεπεραστούν τυχόν αδυναμίες του. Οι επιστήμονες κατορθώνουν να αναπλάθουν το μόριο RNA ώστε να στοχεύει ταυτόχρονα σε πολλαπλά σημεία του γονιδιώματος καθώς και να κατασκευάζουν νέες παραλλαγές των Cas9 νουκλεασών με ξεχωριστές ιδιότητες. Παραλλαγές της Cas9, όπως οι νουκλεάσες υψηλής πιστότητας, ήταν η τελευταία εξέλιξη αυτής της τεχνολογίας με την πιο ελπιδοφόρα από όλες το νεότερο μοντέλο: HypaCas9.
Η παρούσα διπλωματική εργασία επικεντρώνεται στην έκφραση και τον καθαρισμό της HypaCas9. Σκοπός αυτού είναι η χρήση της πρωτεΐνης σε ριβονουκλεοπρωτεΐνικο σύμπλοκο για πραγματοποίηση πειραμάτων που αφορούν την επεξεργασία γονιδιώματος στο ζωοτροφείο του IMBB-FORTH (ΙΤΕ). Σε αυτή τη μεταπτυχιακή εργασία παρουσιάζεται η διαδικασία που ακολουθείται για την μεγάλης κλίμακας έκφραση και την ανάπτυξη ενός αποτελεσματικού πρωτοκόλλου καθαρισμού. Η τελική πρωτεΐνη πρέπει να είναι αρκετά καθαρή ώστε να περάσει όλες τις δοκιμές ελέγχου ποιότητας και την τελική in vitro δοκιμή που αποδεικνύει τη λειτουργικότητά της.
|
| Φυσική περιγραφή |
54 σ. : σχεδ., πίν., εικ.(μερ. εγχρ.) ; 30 εκ. |
| Γλώσσα |
Αγγλικά |
| Θέμα |
CRISPR |
|
High fidelity |
|
HypaCas9 |
| Ημερομηνία έκδοσης |
2018-11-23 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Εμφανίσεις |
274 |
Large scale expression and purification of a high fidelityCas9 nuclease
