| Περίληψη |
Στην παρούσα εργασία μελετήθηκαν οι ιδιότητες του μεταθετού στοιχείου Minos ως
εργαλείου γονιδιωματικής ανάλυσης στη Δροσόφιλα. Αναπτύχθηκαν συστήματα in vivo
κινητοποίησης τρανσποζονίων του στοιχείου μέσω επαγόμενης έκφρασης
τρανσποζάσης, που χαρακτηρίζονται από υψηλά ποσοστά κινητοποίησης των
τρανσποζονίων. H ανάλυση 100 περίπου ενθέσεων του Minos στη Δροσόφιλα έδειξε τη
δυνατότητα του στοιχείου να εντίθεται σε γονίδια στα οποία δεν έχουν επιλεχθεί
ενθέσεις άλλων μεταθετών στοιχείων μέχρι τώρα. Επίσης, βρέθηκε ότι τα εσώνια των
γονιδίων αποτελούν προτιμούμενους στόχους σε σχέση με τα εξώνια. Η ανάλυση της
πρωτοταγούς δομής και των φυσικών ιδιοτήτων τoυ DNA στα σημεία ένθεσης του
στοιχείου έδειξε ότι η πρωτοταγής ακολουθία του DNA που περιβάλλει τα
δινουκλεοτίδια ΤΑ στα σημεία ένθεσης του στοιχείου επηρεάζει σε μικρότερο βαθμό την
επιλογή της θέσης ένθεσης του Minos, σε σχέση με άλλα μεταθετά στοιχεία της
υπεροικογένειας Tc1/mariner. Oι φυσικές ιδιότητες του DNA στις θέσεις ένθεσης του
στοιχείου φαίνεται ότι επηρεάζουν σε σημαντικό βαθμό την επιλογή της θέσης ένθεσης.
Αν και οι ενθέσεις του Minοs σε εσώνια γονιδίων δεν προκαλούν γονιδιακές
μεταλλαγές, δείξαμε ότι η απαλειφή γειτονικών περιοχών εσωνίων και επομένως η
μεταλλαγή του σχετικού γονιδίου μπορεί να γίνει μετά από την κινητοποποίηση του
στοιχείου από την αρχική θέση ένθεσης.
Αναπτύχθηκε ένα σύστημα παγίδευσης ενισχυτών με χρήση του γονιδίου Gal4 ως
πρώτου γονιδίου αναφοράς. Τα πρότυπα γονιδιακής έκφρασης που ανιχνεύτηκαν με
την τεχνική παγίδευσης ενισχυτών και τα πρότυπα έκφρασης των ενδογενών γονιδίων,
όπως προέκυψαν μετά από την τεχνική του υβριδισμού με RNA, ήταν παρόμοια.
Η ανάλυση 1000 ενθέσεων που χαρακτηρίστηκαν από την ομάδα του Προγράμματος
μεταλλαγής των γονιδίων της Δροσόφιλας κατέδειξε το γεγονός ότι το στοιχείο Minοs
εντίθεται με μεγαλύτερη συχνότητα σε νέα γονίδια σε σχέση με το στοιχείο Ρ. Η
χρησιμοποίηση του Minοs ως βασικού εργαλείου μεταλλαγής των γονιδίων της
Δροσόφιλας από το Πρόγραμμα μεταλλαγής των γονιδίων της Δροσόφιλας θα
επισπεύσει την ολοκλήρωση του σχετικού Προγράμματος.
|
Το μεταθετό στοιχείο Minos ως εργαλείο λειτουργικής γονιδιωματικής ανάλυσης στη Δροσόφιλα
