Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Μοριακή ανάλυση δύο μεταγραφικών παραγόντων (hCSDA, DbpB) και συσχετισμός τους με τη μεταγραφική ενεργότητα των υποκινητών των γονιδίων της α-σφαιρίνης του ανθρώπου  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου uch.biology.phd//1998kontaraki
Τίτλος Μοριακή ανάλυση δύο μεταγραφικών παραγόντων (hCSDA, DbpB) και συσχετισμός τους με τη μεταγραφική ενεργότητα των υποκινητών των γονιδίων της α-σφαιρίνης του ανθρώπου
Άλλος τίτλος Molecular analysis of two transcription factors (hCSDA and DbpB) related to the transcriptional activity of human α-globin gene promoters
Συγγραφέας Κονταράκη, Ιωάννα
Σύμβουλος διατριβής Μοσχονάς, Νικόλαος
Περίληψη Προκειμένου να απομονωθούν πρωτεϊνικά μόρια που αλληλεπιδρούν με την περιοχή από -492 ως -477 (θέση G7) του υποκινητή της α-σφαιρίνης τα οποία ενδεχομένως παίζουν ρυθμιστικό ρόλο, χρησιμοποιήθηκε βιβλιοθήκη έκφρασης μορίων cDNA από ερυθρολευχαιμικά κύτταρα K562, και απομονώθηκε ένα μόριο cDNA το οποίο κωδικοποιεί για μια πρωτεΐνη που ονομάσαμε "human Cold Shock Domain protein A" (hCSDA) η οποία ταυτίζεται με την DbpAv, και ένα μόριο cDNA, ταυτόσημο με το cDNA που κωδικοποιεί για την "DNA binding protein B" (DbpB). Oι hCSDA και DbpB ανήκουν σε μια οικογένεια πρωτεϊνών που χαρακτηρίζεται από την ύπαρξη μιας συντηρημένης πρωτεϊνικής περιοχής, της "Cold Shock Domain", η οποία παρουσιάζει δυνατότητα πρόσδεσης σε μονόκλωνα και δίκλωνα νουκεϊκά οξέα (DNA και RNA). Mέλη αυτής της οικογένειας έχουν απομονωθεί από διάφορους οργανισμούς, συμπεριλαμβανομένων βακτηρίων, φυτών και ζώων. Tμήματα cDNA της hCSDA χρησιμοποιήθηκαν για το χρωμοσωμικό εντοπισμό των αντίστοιχων γονιδίων με ανάλυση Southern σε DNA από μονοχρωμοσωμικά κυτταρικά υβρίδια ανθρώπου - τρωκτικού. Tα δύο γονίδια χαρτογραφήθηκαν στα χρωμοσώματα 12 και 16. Eπίσης, γενωμικοί κλώνοι από ανθρώπινες βιβλιοθήκες YAC και PAC που αντιστοιχούν στο γονίδιο που χαρτογραφείται στο χρωμόσωμα 16, απομονώθηκαν και αξιοποιήθηκαν για την ταυτοποίηση και τον ακριβέστερο χρωμοσωμικό εντοπισμό του αντίστοιχου γονιδίου με ανάλυση FISH. To γονίδιο αυτό εντοπίστηκε στη χρωμοσωμική θέση 16p11.2. H σχετική μεταγραφική ενεργότητα των γονιδίων της hCSDA και της DbpB διαφέρει σε μια σειρά ιστών και κυτταρικών σειρών ανθρώπου και ποντικού, και καταστέλλεται σε ερυθροειδικές (K562 και MEL) ή μυελοειδικές κυτταρικές σειρές (HL-60) μετά από χημική επαγωγή διαφοροποίησης. Aντίστροφη συσχέτιση των επιπέδων αφθονίας των μεταγράφων της hCSDA και της DbpB με τα αυξημένα επίπεδα εκείνων της α-σφαιρίνης σε διαφοροποιημένες ερυθροειδικές σειρές, υποδεικνύει πιθανή αρνητική ρύθμιση των γονιδίων της α-σφαιρίνης από τις πρωτεΐνες αυτές. Eπιπλέον, η καταστολή της έκφρασης της hCSDA και της DbpB σε διαφοροποιημένες κυτταρικές σειρές υποδηλώνει πιθανή εμπλοκή αυτών των πρωτεϊνών στους μηχανισμούς ρύθμισης του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Πρωτεΐνες hCSDA και DbpB που είχαν εκφραστεί σε βακτήρια χρησιμοποήθηκαν για τον προσδιορισμό της ειδικότητας πρόσδεσης σε μονόκλωνο και δίκλωνο DNA της θέσης G7. Oι πρωτεΐνες αναγνωρίζουν μια διαδοχή πολυπυριμιδίνης, η οποία θα μπορούσε να συμμετέχει στο σχηματισμό δομής H-DNA και προσδένονται με 10 φορές μεγαλύτερη συγγένεια σε μονόκλωνο απ’ ότι σε δίκλωνο ολιγονουκλεοτίδιο που αντιστοιχεί στη θέση G7, αν και φαίνεται να υπάρχει μεγαλύτερη εξειδίκευση αλληλουχίας για την πρόσδεση σε δίκλωνα μόρια. H πρόσδεση σε μονόκλωνο DNA και η σταθεροποίηση της δομής H-DNA είναι ένας πιθανός μηχανισμός αρνητικής μεταγραφικής δράσης μέσω παρεμπόδισης της πρόσδεσης θετικών παραγόντων στην περιοχή. Πειράματα συνδιαμόλυνσης φορέων έκφρασης της hCSDA και της DbpB και διαφόρων κατασκευών αναφοράς του υποκινητή της α-σφαιρίνης σε κύτταρα K562, COS-7 και HeLa, έδειξαν ότι οι πρωτεΐνες hCSDA και DbpB δρουν αρνητικά στη μεταγραφική ενεργότητα του υποκινητή της α-σφαιρίνης μέσω της πρόσδεσής τους στη θέση G7 αλλά και σε παρόμοιες αλληλουχίες του υποκινητή. Δείχτηκε επίσης ότι οι πρωτεΐνες hCSDA και DbpB αλληλεπιδρούν άμεσα με τον μεταγραφικό παράγοντα Sp1. O υποκινητής της α-σφαιρίνης περιέχει πολλαπλές θέσεις πρόσδεσης για τον παράγοντα Sp1. Φαίνεται ότι ο Sp1 παίζει σημαντικό ρόλο για την αλληλεπίδραση του στοιχείου HS40 με τον υποκινητή. Έχει υποτεθεί ότι θα μπορούσε να συμμετέχει στην από μακριά ερυθροειδική ενεργοποίηση υποκινητών σφαιρινών μέσω της αλληλεπίδρασής του με την πρωτεΐνη GATA-1. Ένας πιθανός τρόπος δράσης της hCSDA και της DbpB θα μπορούσε να είναι η παρεμπόδιση της αλληλεπίδρασης του παράγοντα Sp1 με την πρωτεΐνη GATA-1 και συνεπώς της αλληλεπίδρασης του ρυθμιστικού στοιχείου HS-40 με τους υποκινητές της α-σφαιρίνης.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα Α-σφαιρίνη; Εξελίξεις; Μεταγραφικές ρυθμίσεις; Χρωμοσωμικός εντοπισμός
Ημερομηνία έκδοσης 1998-06-25
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Διδακτορικές διατριβές
  Τύπος Εργασίας--Διδακτορικές διατριβές
Εμφανίσεις 37

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 2