Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Frem3: ένα νέο μέλος της οικογένειας των γονιδίων Fras1/Frem. Εντοπισμός έκφρασης στον ποντικό και απομόνωση γενωμικών ενθεμάτων  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου uch.biology.msc//2005pavlakis
Τίτλος Frem3: ένα νέο μέλος της οικογένειας των γονιδίων Fras1/Frem. Εντοπισμός έκφρασης στον ποντικό και απομόνωση γενωμικών ενθεμάτων
Συγγραφέας Παυλάκης, Ευάγγελος
Περίληψη To βασικό έλασμα είναι ένας ευέλικτος λεπτός σχηματισμός εξωκυττάριας, ουσίας που βρίσκεται σε όλους σχεδόν τους πολυκύτταρους οργανισμούς, και η οποία διαμερισματοποιεί τους ιστούς, λειτουργεί ως εμπόδιο για την ανεξέλγκτη διέλευση μακρομορίων και παγιδεύει μια σειρά από σηματοδοτικά μόρια και αυξητικούς παράγοντες. Με ηλεκτρονική μικροσκοπια διέλευσης, διαχωρίζεται σε δύο διακριτές περιοχές, τη lamina lucida, τη lamina densa, καθώς και μια περιοχή που υπόκειται της τελευταίας, τη sub-lamina densa. Το γονίδιο Fras1 (Fraser syndrome protein 1), κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη του εξωκυττάριου χώρου, η οποία προέρχεται αποκλειστικά από εμβρυϊκά επιθήλια και εντοπίζεται στην περιοχή της sub-lamina densa. Μια από τις 5 bleb μεταλλαγές, η blebbed έχει αποδοθεί στο γονίδιο Fras1. Αντίστοιχα, 2 από τις 5 bleb μεταλλαγές έχουν αποδοθεί σε διαφορετικά γονίδια της οικογένειας Fras1/Frem πρωτεϊνών (τα Frem1 και Frem2), ενώ μια ακόμα μεταλλαγή αποδόθηκε στο γονίδιο Grip1, το οποίο κωδικοποιεί μια κυτταροπλασματική πρωτεΐνη πλούσια σε PDZ περιοχές. Η 5η μεταλλαγή δεν έχει χαρτογραφηθεί, ενδεχομένως όμως το γονίδιο Frem3 το οποίο παρουσιάζει σημαντική ομολογία με το Fras1, να είναι υπεύθυνο για την μεταλλαγή αυτή. Όλες οι bleb μεταλλαγές παρουσιάζουν τον ίδιο φαινότυπο, δηλαδή υποεπιδερμικές φουσκαλίδες, συνδακτυλίες και κρυπτοφθαλμία. Με στόχο την κατανόηση της μοριακής βάσης του συνδρόμου Fraser και των πιθανών αλληλεπιδράσεων μεταξύ των πρωτεϊνών της οικογένειας Fras1/Frem, στην παρούσα εργασία πραγματοποιήσαμε διερεύνηση φαγικών βιβλιοθηκών, με σκοπό την την απομόνωση τμημάτων των γενωμικών DNA των γονιδίων Frem2 και Frem3, καθώς και την απομόνωση του cDNA του γονιδίου Frem2. Το cDNA του γονιδίου Frem2 θα χρησιμοποιηθεί σε πειράματα πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων, ενώ το γενωμικό DNA του Frem3 γονιδίου θα χρησιμεύσει για την απενεργοποίησή του σε ποντίκια με ομόλογο ανασυνδυασμό. Στην εργασία αυτή καταφέραμε να απομονώσουμε 6 θετικούς κλώνους οι οποίοι φέρουν τμήμα του cDNA του γονιδίου Frem2 και προχωρούμε παραπέρα στον χαρακτηρισμό τους. Aκόμα, όσον αφορά την απομόνωση του γενωμικού τμήματος του γονιδίου Frem3, έχουμε απομονώσει μια σειρά από κλώνους οι οποίοι θα χρησιμοποιηθούν για την τελική σάρωση, ενώ αντίστοιχα και για το γενωμικό τμήμα του Frem2, απομονώσαμε 6 κλώνους οι οποίοι θα χρησιμοποιηθούν για τη δεύτερη σάρωση. Παράλληλα, και με σκοπό τον παραπέρα χαρακτηρισμό του γονιδίου Frem3, το οποίο δεν έχει μέχρι τώρα μελετηθεί, πραγματοποιήθηκαν μελέτες του προτύπου έκφρασής του, σε τομές εμβρύων ποντικού αγρίου τύπου, μέσα από τεχνικές ανοσοϊστοχημείας και RNA in situ υβριδοποίησης (ΙSH). Τα αποτελέσματα από την ISH, φανέρωσαν την επιθηλιακή προέλευση και αυτού του γονιδίου, όπως συμβαίνει και με τα υπόλοιπα γονίδια της οικογένειας. Eπιλπέον, με τα πειράματα ανοσοανίχνευσης η πρωτεΐνη εντοπίστηκε στις βασικές μεμβράνες διαφόρων ιστών, από ποικίλα αναπτυξιακά στάδια, ξεκινώντας από την Ε11.5 και φτάνοντας την Ε15.5 να παρουσιάζει το εντονότερο πρότυπο έκφρασης. Παρόλα αυτά, εντοπίστηκε και σε κάποιους ιστους να περιβάλλει τους πυρήνες των επιθηλιακών κυττάρων, όπως ακριβώς και η πρωτεΐνη Frem1, και αντίθετα με τις Fras1/Frem2, υποδυκνείοντας μια πιθανή συνεργασία των δυο πρωτεϊνών, αλλά και τον ενδεχόμενο ενδοκυτταρικό εντοπισμό της.
Γλώσσα Ελληνικά
Ημερομηνία έκδοσης 2005-11-28
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 25

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 2