|
|
| Κωδικός Πόρου |
000412706 |
| Τίτλος |
Characterization of the molecular functions of the DNA methyltransferase 1, DNMT1 in erythropoiesis |
| Άλλος τίτλος |
Διερεύνηση της λειτουργίας της DNMT1 DNA μεθυλτρανσφεράσης κατά την ερυθροποίηση |
|
Συγγραφέας
|
Βλαχοκώστα, Δήμητρα Α.
|
|
Σύμβουλος διατριβής
|
Στρουμπούλης, Γιάννης
|
| Περίληψη |
Η DNA μεθυλίωση είναι απαραίτητη κατά την εμβρυική ανάπτυξη και εμπλέκεται σε διάφορες βιολογικές διαδικασίες. Η DNA μεθυλοτρανσφεράση DNMT1 διατηρεί το πρότυπο μεθυλίωσης του προγονικού κυττάρου στους απογόνους του κατά την διαδικασία της αντιγραφής. Μελέτες DNMT1 Knock out/down (KO/KD) είτε σε αιμοποιητικές σειρές είτε σε ποντίκια έδειξαν ότι η DNMT1 καθοδηγεί τα HSCs να διαφοροποιηθούν προς κύτταρα της μυελικής σειράς. Η DNMT1 εμπλέκεται στη σίγηση της γ-σφαιρίνης των ερυθροκυττάρων στο ενήλικο στάδιο μεθυλιώνοντας τον υποκινητή της γ-σφαιρίνης και αλληλεπιδρώντας με πρωτεΐνες (TR2/TR4, BCL11A). Σε δημοσίευση του εργαστηρίου μας δείξαμε ότι η DNMT1 αλληλεπιδρά με διάφορους αιμοποιητικούς μεταγραφικούς παράγοντες (GATA1, FOG-1, GFI-1b) που εμπλέκονται στη διαφοροποίηση των ερυθροκυττάρων, δημιουργώντας ένα κύριο πρωτεϊνικό σύμπλοκο αποτελούμενο από την DNMT1 και τους μεταγραφικούς παράγοντες ZBP89 και ZNF143, το οποίο υφίστατο και σε μη αιμοποιητικά κύτταρα και αλληλεπιδρά με διακριτά υποσύμπλοκα αιμοποιητικών παραγόντων στα ερυθροκύτταρα. Επιπλέον, το μικρό PCNA Binding domain (PBD) της DNMT1 είναι αναγκαίο και ικανό για την αλληλεπίδραση της DNMT1 με μεταγραφικούς παράγοντες. Περαιτέρω στοιχεία υποδεικνύουν ότι η DNMT1 λειτουργεί ως συγκαταστολέας με ZBP89 και GATA1 δρώντας σε άνωθεν ρυθμίστηκα στοιχεία των γονιδίων των κύριων αιμοποιητικών παραγόντων PU.1 και GATA1. Ακόμη DNMT1 KD σε MEL κύτταρα έδειξε μια ξεκάθαρη αδυναμία στην παύση του κυτταρικού κύκλου κατά την διαφοροποίηση των ερυθροκυττάρων εξαιτίας της έλλειψης καταστολής γονιδίων υπεύθυνα για τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Ο κύριος στόχος της συγκεκριμένης έρευνας είναι να διαλευκάνει περαιτέρω τον ρόλο της DNMT1 κατά την διαδικασία της διαφοροποίησης των ερυθροκυττάρων. Για τον σκοπό αυτό, προσπαθήσαμε να δημιουργήσουμε και να χαρακτηρίσουμε DNMT1 KO MEL κύτταρα. Επίσης, προσπαθήσαμε να εξακριβώσουμε περαιτέρω πρωτεϊνικούς παράγοντες με τους οποίους η DNMT1 αλληλεπιδρά ώστε να εντοπίσουμε τις λειτουργίες στις οποίες εμπλέκεται χρησιμοποιώντας μια μέθοδο, η οποία φέρει ως επίτοπο την βιοτίνη στο πρωτεϊνικό μόριο ενδιαφέροντος, συζευγμένη με φασματομετρία μάζας. Ένας ακόμα στόχος της συγκεκριμένης έρευνας είναι να εντοπίσουμε τους γονιδιακούς στόχους της DNMT1 οι οποίοι καταστέλλονται μέσω της δράσης ενός μηχανισμού εξαρτώμενου ή ανεξάρτητου της DNA μεθυλίωσης, δεδομένου ότι η DNMT1 είναι η κύρια μεθυλοτρανσφεράση που εκφράζεται στα ερυθροκύτταρα και τα χαμηλά επίπεδα μεθυλίωσης στο γονιδίωμα των ερυθροκυττάρων. Ακόμη, προσπαθήσαμε να διερευνήσουμε κατά πόσο το μικρό PCNA binding domain (PBD) της DNMT1 την καταστεί ικρίωμα για την προσέλκυση επιπρόσθετων κατασταλτικών παραγόντων που επάγουν την γονιδιακή σίγηση διεξάγοντας πειράματα επαναφοράς φαινοτύπου σε DNMT1 KO κύτταρα τα οποία διαμολύνονται μόνιμα με DNMT1 μεταλλάγματα απαλοιφής.
|
| Φυσική περιγραφή |
29 φύλλα : σχεδ., πίν., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ. |
| Γλώσσα |
Αγγλικά |
| Θέμα |
Cell cycle arrest |
|
DNA Methylation |
|
DNA Μεθυλίωση |
|
Erythroid differentiation |
|
PBD:PCNA binding domain |
|
Διαφοροποίηση των ερυθροκυττάρων |
|
Κυτταρικός κύκλος |
| Ημερομηνία έκδοσης |
2017-11-22 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Εμφανίσεις |
264 |
Characterization of the molecular functions of the DNA methyltransferase 1, DNMT1 in erythropoiesis
