| Περίληψη |
Η αντιγονοπαρουσίαση, που αποτελεί κλειδί στη σωστή λειτουργία του
ανοσολογικού συστήματος, είναι μια αυστηρά ελεγχόμενη διαδικασία και ρυθμίζεται από πλήθος ανεξάρτητων παραγόντων. Ανάμεσα σε αυτούς τους παράγοντες σημαντική θέση κατέχουν τα τάξης Ι και ΙΙ αντιγόνα του Κυρίου Συμπλόκου Ιστοσυμβατότητας, η παρουσία των οποίων διασφαλίζει τη φόρτωση τους με αντιγονικά πεπτίδια.
Η απώλεια των HLA αντιγόνων σε καρκινικά κύτταρα διαταράσσει την έναρξη και τη διατήρηση της ανοσολογικής απόκρισης μέσω πλημμελούς ενεργοποίησης των CD4+
λεμφοκυττάρων. Πολλά λευχαιμικά κύτταρα χρησιμοποιούν τέτοιους μηχανισμούς για να διαφύγουν της ανοσολογικής επαγρύπνησης ενώ επιπλέον σε ασθενείς με λευχαιμία ή
λέμφωμα η έκφραση των τάξης ΙΙ μορίων του Κ ΣΙ συσχετίζεται με καλύτερη έκβαση και
πρόγνωση της ασθένειας.
Στην παρούσα εργασία εξετάσαμε τις λευχαιμικές σειρές K562 και HL-60
αναφορικά με την ενδοκυτταρική έκφραση τάξης ΙΙ μορίων. Η ανίχνευση
πραγματοποιήθηκε με κυτταρομετρία ροής, συνεστιακή και ηλεκτρονική μικροσκοπία. Το πρωτεϊνικό προφίλ ελέγχθηκε επίσης, σε μοριακό επίπεδο, με πειράματα RT-PCR.
Τα αποτελέσματα, που παρουσιάζονται στη συνέχεια έδειξαν ότι παρά την
απουσία μεμβρανικών τάξης ΙΙ μορίων τα λευχαιμικά κύτταρα διαθέτουν ενδοκυτταρικά αποθέματα των DR και DM ενώ εκφράζουν συστηματικά την CD74 και την β αλυσίδα του
DO. Οι διπλοί ανοσοφθορισμοί αποκάλυψαν τον συνεντοπισμό όλων αυτών των μορίων σε κυστίδια, που ταυτοποιούνται ως ώριμα ενδοσώματα από την έκφραση της πρωτεΐνης
Rab7. Για να απαντήσουμε στο ερώτημα κατά πόσο η DOβ αλυσίδα από μόνη της μπορεί να εξέρχεται από το ενδοπλασματικό δίκτυο και να οδηγείται στα ενδοσώματα την κλωνοποιήσαμε στα Κ562 κύτταρα, συντηγμένη με τη φθορίζουσα πρωτεΐνη eGFP. Τα
αποτελέσματα της συνεστιακής μικροσκοπίας επιβεβαίωσαν ότι πράγματι η συντηγμένη DOβ-eGFP μπορεί να οδηγείται στα ενδοσώματα απουσία της DOα αλυσίδας. Επιπλέον
κλωνοποιήσαμε και την DOα αλυσίδα συντηγμένη με την dsRED και δημιουργήσαμε μονά και διπλά διαμολυσμένους πληθυσμούς. Οι χειρισμοί αυτοί μας έδωσαν τη δυνατότητα να παρακολουθούμε την έκφραση και τη μετακίνηση των μορίων χωρίς τη χρήση αντισωμάτων.
Ακόμα μελετήσαμε το πρωτεϊνικό προφίλ αναφορικά με τα τάξης ΙΙ μόρια, των δύο λευχαιμικών σειρών κατόπιν επίδρασης για 6 ώρες με IFN-γ καθώς επίσης και των Κ562_CIITA διαμολυσμένων κυττάρων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και οι δύο
παράγοντες (η IFN-γ και ο CIITA) μπορούν να επάγουν την έκφραση του DR στην πλασματική μεμβράνη. Τέλος πειράματα ηλεκτροφόρησης και western blotting αποκάλυψαν τη δημιουργία συμπλόκου ανάμεσα στα DR και DOβ.
Συμπερασματικά μπορούμε να πούμε ότι τα λευχαιμικά κύτταρα, που εξετάσαμε
παρά την απουσία επιφανειακών τάξης ΙΙ μορίων διαθέτουν ενδοκυτταρικά αποθέματα DR τα οποία μπορούν να μεταφερθούν στη μεμβράνη κατόπιν επίδρασης με IFN-γ. Η ταυτόχρονη παρουσία της DOβ αλυσίδας στα ίδια ενδοσώματα με τα τάξης ΙΙ μόρια δίνει
νέες προοπτικές στο ρόλο του HLA-DO στην αντιγονοπαρουσίαση κάνοντας την
περισσότερο πολύπλοκο θέμα από ότι πιστευόταν αρχικά. Βάση όλων αυτών των αποτελεσμάτων διατυπώνουμε έναν μηχανισμό ρύθμισης και διατήρησης του DR αρνητικού φαινοτύπου στα λευχαιμικά κύτταρα σύμφωνα με τον οποίο το DR εγκλωβίζεται στα ενδοσώματα δημιουργώντας απευθείας σύμπλοκο με το DO.
|
Μελέτη πρωτεϊνών βιοϊατρικού - θεραπευτικού ενδιαφέροντος : Μελέτη της αλληλεπίδρασης των πρωτεϊνών HLA-DR και -DO στη δημιουργία συμπλόκου προς διαφυγή της ανοσολογικής επαγρύπνησης σε λευχαιμικά κύτταρα
