| Περίληψη |
Η πρωτεΐνη Tim12 του Saccharomyces cerevisiae, είναι μία μιτοχονδριακή πρωτεΐνη του διαμεμβρανικού χώρου που ανήκει στην οικογένεια των μικρών Tim. Οι μικρές Tim σχηματίζουν διαλυτά σύμπλοκα στο διαμεμβρανικό χώρο που λειτουργούν ως σαπερόνες των υδρόφοβων προ-πρωτεϊνών που στοχεύνται στη εσωτερική μιτοχονδριακή μεμβράνη. Η πρωτεΐνη Tim12 είναι η μόνη μικρή Tim πρωτεΐνη που είναι αποκλειστικά προσδεδεμένη περιφερικά με την επιφάνεια της εσωτερικής μεμβράνης. Αποτελεί μέρος του συμπλόκου ΤΙΜ22 που εισάγει τις πολυτοπικές πρωτεΐνες στην εσωτερική μεμβράνη. Ο ρόλος της στην είσοδο των προ-πρωτεϊνών δεν είναι γνωστός, αν και γνωρίζουμε ότι δρα μετά την πρόσδεση του υποστρώματος με το σύμπλοκο ΤΙΜ10. Στην παρούσα εργασία, μελετήθηκαν τα μεταλλάγματα προλίνης της πρωτεΐνης Tim12. H Tim12 περιλαμβάνει τρεις προλίνες (Ρ46, Ρ53, Ρ88) οι οποίες μεταλλάχθηκαν σε αλανίνες. Βρέθηκε ότι το μετάλλαγμα P88A είναι θνησιγόνο, σε αντίθεση με το Ρ46Α, που αναπτύσσεται όπως το αγρίου τύπου στέλεχος. Εντούτοις, η μεταλλαγή της προλίνης 88 δεν βρέθηκε να επηρεάζει ούτε την είσοδο της Tim12 στα μιτοχόνδρια ούτε την στόχευσή της στην περιφέρεια της εσωτερικής μεμβράνης. In vitro, η ανασυνδυασμένη μορφή της Tim12 και των μεταλλαγμάτων της παρουσιάζουν τον ίδιο βαθμό ολιγομερισμού ενώ η σταθερότερη μορφή τους είναι η διμερισμένη. Παράλληλα, σε μεμβράνη με ακινητοποιημένα πεπτίδια του υποστρώματος AAC, βρέθηκε ότι το διμερές του μεταλλάγματος αλληλεπιδρά με τις διαμεμβρανικές περιοχές του υποστρώματος όπως και το αγρίου τύπου διμερές. Τα μεταλλάγματα προλίνης καθώς και η αγρίου τύπου πρωτεΐνη φαίνεται να αλληλεπιδρούν εξίσου με την πρωτεΐνη Tim9, σε πειράματα συμμετανάστευσης σε διάλυμα βαθμίδωσης συγκέντρωσης σουκρόζης. Εντούτοις, το τρυπτικό πρότυπο της μεταλλαγμένης Τim12, κατά την αλληλεπίδραση με την Tim9, διαφέρει ελαφρώς από το τρυπτικό πρότυπο της αγρίου τύπου Tim12 κατά την αλληλεπίδραση με την Tim9. Προτείνεται ότι η προλίνη 88 μπορεί να παίζει σημαντικό ρόλο στην αλλαγή διαμόρφωσης στο μόριο της Tim12, κατά την αλληλεπίδρασή της με τη Tim9, γεγονός που είναι απαραίτητο για την περαιτέρω απόδοση του υποστρώματος από το σύμπλοκο TIM10 στο σύμπλοκο ΤΙΜ22, μέσω του οποίου θα ενσωματωθεί στην εσωτερική μιτοχονδριακή μεμβράνη.
|
Λειτουργική ανάλυση της μετατοπασης tim12 του μιτοχονδριακού συμπλόκου μετατόπισης πρωτεϊνών tim22
