Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    hGDH1 and 2 over-expression and co-expression in cell lines  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000392817
Τίτλος hGDH1 and 2 over-expression and co-expression in cell lines
Άλλος τίτλος hGDH1 και 2 υπερέκφραση και συν-έκφραση σε κυτταρικές σειρές
Συγγραφέας Μαθιουδάκης, Λάμπρος
Σύμβουλος διατριβής Ζαγανάς, Ιωάννης
Περίληψη Θεωρητικο υπόβαθρο: Η γλουταμική αφυδρογονάση, ένα ένζυμο που υπάρχει σε διάφορους ιστούς θηλαστικών, καταλύει την αναστρέψιμη αντίδραση απαμίνωσης του γλουταμικού σε α-κετογλουταρικό και αμμωνία. Δύο ισομορφές γλουταμικής αφυδρογονάσης απαντώνται στον άνθρωπο, η hGDH1 και η hGDH2, αντιστοίχως. Η hGDH1 είναι ένζυμο που εκφράζεται σε όλα τα κύτταρα του ανθρώπινου οργανισμού. Απεναντίας, η hGDH2 μέχρι στιγμής έχει εντοπιστεί σε κύτταρα του εγκεφάλου, όρχεων και νεφρών. Χαρακτηριστικό των δύο ισο-ενζύμων είναι η αλλοστερική ενεργοποίηση από ADP και λευκίνη καθώς και η αναστολή της δράσης τους από την παρουσία GTP. Οι γλουταμικές αφυδρογονάσες συμβάλλουν σε σημαντικές κυτταρικές λειτουργίες καθώς συνδέουν το μεταβολισμό των υδατανθράκων με αυτόν των αμινοξέων, ρυθμίζουν τον μεταβολισμό του γλουταμικού ως νευροδιαβιβαστή και την έκκρισης ινσουλίνης, και τέλος, συμμετέχουν στην παραγωγή ενέργειας και την ομοιόσταση της αμμωνίας. Προηγούμενες μελέτες έχουν αποδείξει ότι τα ένζυμα αυτά εντοπίζονται στη μήτρα των μιτοχονδρίων. Στόχοι της μελέτης: Οι στόχοι της μελέτης είναι δύο, ο πρώτος να επιβεβαιωθεί η υποκυτταρική συνεντόπιση των hGDH1 και hGDH2 και ο δεύτερος να μελετηθεί το αποτέλεσμα της υπερέκφρασης hGDH1 και hGDH2 σε κυτταρικές σειρές. Μέθοδοι: Ως προς τον πρώτο στόχο της παρούσας μελέτης, έγινε ιχνηθέτηση των ενζύμων με διαφορετικών χρωμάτων φθορίζουσες πρωτεΐνες, ώστε να επιβεβαιωθεί η υποκυτταρική τους συνεντόπιση. Ως προς τον δεύτερο στόχο της μελέτης, έγινε δημιουργία κυτταρικών σειρών HEK293 που υπερεκφράζουν είτε hGDH1 είτε hGDH2, ώστε στη συνέχεια να μελετηθεί ο αντίστοιχος φαινότυπος. Αποτελέσματα: Τα πειραματικά αποτελέσματα των μελετών μας σχετικά με τον εντοπισμό των δύο ανθρώπινων γλουταμικών αφυδρογονασών υποδηλώνουν ότι τα ένζυμα αυτά συνεντοπίζονται υποκυτταρικά εντός των μιτοχονδρίων. Συγκεκριμένα, έπειτα από ιχνηθέτηση της hGDH1 με πράσινο χρώμα και της hGDH2 με κόκκινη φθορίζουσα πρωτεΐνη, επιβεβαιώνεται σύμφωνα με τη διακριτική ικανότητα του μικροσκοπίου που χρησιμοποιήθηκε ότι συνεντοπίζονται στα μιτοχόνδρια. Επίσης, σύμφωνα με τα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν για το φαινοτυπικό χαρακτηρισμό των κυτταρικών σειρών που δημιουργήθηκαν, τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν ότι τα κύτταρα HEK293 που υπερεκφράζουν είτε hGDH1 είτε hGDH2 εμφανίζουν μειωμένα ποσοστά νεκρών κυττάρων σε διάφορα στάδια της ανάπτυξης τους σε καλλιέργεια. Συγκεκριμένα, το ποσοστό νεκρών κυττάρων που αναγνωρίστηκαν στην καλλιέργεια 24 ώρες μετά την σπορά των κυττάρων, ήταν περίπου 35% στα αγρίου τύπου κύτταρα, ενώ στις κυτταρικές σειρές που 5 υπερεκφράζουν hGDH1 και hGDH2 ήταν 10-15% (p value<0,0001) και 5–15% (p value<0,0001), αντιστοίχως. Συμπέρασματα: Συμπερασματικά, τα πειραματικά μας αποτελέσματα δείχνουν υποκυτταρική συνεντόπιση hGDH1 και hGDH2, και σημαντικό ρόλο και των δύο στην κυτταρική ανάπτυξη. Τα αποτελέσματα αυτά χρειάζεται να αναλυθούν και να διερευνηθούν εκτενέστερα, ώστε να εξακριβωθεί ο ρόλος των ανθρώπινων ισοενζύμων γλουταμικής αφυδρογονάσης στην κυτταρική λειτουργία και βιωσιμότητα.
Φυσική περιγραφή 65 σ : πιν. ; 30 εκ.
Γλώσσα Αγγλικά
Ημερομηνία έκδοσης 2015-03-31
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 89

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 6