Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Μεταλλαγές και έκφραση των ογκογονιδίων RAS και BRAF καθώς και αναζήτηση DNA ιών σε ρινικούς πολύποδες του ανθρώπου  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000348347
Τίτλος Μεταλλαγές και έκφραση των ογκογονιδίων RAS και BRAF καθώς και αναζήτηση DNA ιών σε ρινικούς πολύποδες του ανθρώπου
Συγγραφέας Ζαραβίνος, Απόστολος
Σύμβουλος διατριβής Σπαντίδος, Δημήτριος
Μέλος κριτικής επιτροπής Σουρβίνος, Γεώργιος
Μπιζάκης, Ιωάννης
Σαμώνης, Γ.
Κραμποβίτης, Η.
Ζαφειρόπουλος, Α.
Τσατσάνης, Χρήστος
Περίληψη Παρόλο που είναι αρκετά καθιερωμένη η συνεισφορά των ογκογονιδίων ras στην καρκινογένεση, είτε μέσω της συσσώρευσης σε αυτά μεταλλαγών, είτε μέσω της μη φυσιολογικής τους έκφρασης σε έναν μεγάλο αριθμό καρκίνων του ανθρώπου, λίγα είναι γνωστά όσο αναφορά τον ρόλο τους στους ρινικούς πολύποδες του ανθρώπου (NPs). Επίσης, λίγα είναι γνωστά για την έκφραση των γονιδίων BRAF και RKIP, ή για την ύπαρξη πιθανών BRAF μεταλλαγών, στον σχηματισμό των ρινικών πολυπόδων, όπως και για την παρουσία ιών με την εμφάνισή τους. Στην παρούσα μελέτη, ερευνήθηκε η εμφάνιση μεταλλαγών στα κωδικόνια 11, 12 και 13 της οικογένειας των γονιδίων ras, με τεχνικές PCR/RFLP και άμεση αλληλούχιση, σε 23 NPs και τις παρακείμενες σε αυτούς ρινικές κόγχες (κάτω και μέσες) [Control Inferior Turbinates (CIT) και Control Middle Turbinates (CMT)], καθώς επίσης και σε ρινικές κόγχες από 13 φυσιολογικά άτομα (CIT και CMT). Επιπλέον, μελετήθηκε το προφίλ της έκφρασης των ογκογονιδίων ras στo επίπεδo του mRNA στους ρινικούς πολύποδες, και συγκρίθηκε με τα αντίστοιχα επίπεδα έκφρασης στις παρακείμενες και φυσιολογικές ρινικές κόγχες. Όσο αναφορά το δεύτερο κομμάτι της μελέτης αυτής, καθορίστηκαν τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων BRAF και RKIP, και μελετήθηκε η συχνότητα εμφάνισης BRAF μεταλλαγών, στα εξόνια 11, 14 και 15, στους ρινικούς πολύποδες και στις παρακείμενες αλλά και φυσιολογικές ρινικές κόγχες. Αναλύσαμε 24 δείγματα ρινικών πολυπόδων και τις παρακείμενες κάτω και μέσες ρινικές τους κόγχες (AIT και AMT), καθώς επίσης και 14 φυσιολογικά άτομα [συνολικά 14 φυσιολογικές κάτω ρινικές κόγχες και φυσιολογικές μέσες ρινικές κόγχες. Το προφίλ της έκφρασης των γονιδίων BRAF και RKIP αποκτήθηκε με την τεχνική real-time RT-PCR. Επίσης, χρησιμοποιήσαμε realtime allele-specific PCR, σε συνδιασμό με άμεση αλληλούχηση, για να εντοπίσουμε την συχνότητα της μεταλλαγής V600E στο εξόνιο 15, και για να εξετάσουμε την ύπαρξη μεταλλαγών στα εξόνια 11 και 14. Η μελέτη της ύπαρξης του ιού του θηλώματος HPV, και των ερπητοϊών EBV και HSV, καθώς επίσης και η συσχέτισή τους με την εμφάνιση ρινικών πολυπόδων, έγινε με ειδικούς εκκινητές χρησιμοποιώντας PCR, αφού προηγουμένως επιβεβαιώθηκε η παρουσία DNA με εκκινητές ειδικούς για το γονίδιο της β2-μικροσφαιρίνης. Εντοπίσαμε μεταλλαγές στα κωδικόνια 11 και 12 του K-ras στους NPs, σε ποσοστά 17 και 35%, αντίστοιχα, ενώ επίσης εντοπίστηκαν στις παρακείμενες κάτω ρινικές κόγχες (ΑΙΤ) (22 και 16%, αντίστοιχα) και τις παρακείμενες μέσες ρινικές κόγχες (ΑΜΤ) (16 και 26%, αντίστοιχα). Τα επίπεδα έκφρασης των Κ- και Η-ras, ήταν αυξημένα, ενώ τα αντίστοιχα επίπεδα mRNA του N-ras ευρέθησαν να είναι χαμηλότερα στους NPs και τις παρακείμενες ρινικές κόγχες, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς. Τα επίπεδα mRNA του Κ-ras ήταν αυξημένα στους ρινικούς πολύποδες προχωρημένου σταδίου (P=0.037), ενώ τα αντίστοιχα επίπεδα του N-ras ευρέθησαν να είναι αυξημένα στους μικρού μεγέθους πολύποδες (P=0.046). Επίσης προέκυψαν στατιστικά σημαντικές αρνητικές συσχετίσεις ανάμεσα στα προφίλ έκφρασης των K- και N-ras, στους NPs και τις ΑΙΤs (P=0.009 και P=0.003, αντίστοιχα). Σχετικά με το δεύτερο κομμάτι της μελέτης μας, τα αποτελέσματά είχαν ως εξής: Ο βλεννογόνος από τις φυσιολογικές κόγχες παρουσίασε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα mRNA και για τα δυο γονίδια, σε σχέση με τους NP και τις AITAMT. Επίσης, στους NP, τις AIT και ΑΜΤ, το RKIP βρέθηκε να παρουσιάζει υψηλότερα επίπεδα mRNA, σε σχέση με τις αντίστοιχες τιμές του γονιδίου BRAF (P=0.003 στους NP; P<0.001 σε AIT και AMT). Δεν εντοπίστηκε καμία μεταλλαγή στο εξόνιο 14, ενώ παρατηρήθηκε μια σιωπηλή μεταλλαγή (A1380G, G460G) για ένα δείγμα NP στο εξόνιο 11. Ένα άλλο δείγμα πολύποδα βρέθηκε να φέρει δύο μεταλλαγές, μια T1799A (V600E) και μια A1801G (K601E). Επίσης παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση για τα δύο γονίδια, στους ρινικούς πολύποδες (P=0.012) και τις παρακείμενες κάτω ρινικές κόγχες (P=0.019). Αναφορικά με τη μελέτη της ύπαρξης ιών, τρία δείγματα ρινικών πολυπόδων (3/23, 13%), και ένα δείγμα για κάθε παρακείμενη ρινική κόγχη [ΑΙΤ, 1/23 (4%); AMT, 1/12 (4%)], βρέθηκαν θετικά για τον ιό HPV, ωστόσο δεν αναγνωρίστηκε κανένα ογκογόνο στέλεχος (HPV-11, 16, -18, -33). Οκτώ δείγματα ρινικών πολυπόδων (8/23, 35%) ήταν θετικά για τον ιό EBV, και δύο δείγματα (2/23, 8%) ήταν θετικά για τον ιό HSV αντίστοιχα, ενώ καμία παρακείμενη ρινική κόγχη δεν ήταν θετική για την ύπαρξη κανενός από τους δύο τύπους ιών. Όλες οι φυσιολογικές ρινικές κόγχες ήταν επίσης αρνητικές για την ύπαρξη των ιών HPV, EBV και HSV. Από όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη αναφορά πάνω σε μεταλλαγές των ογκογονιδίων ras και της ανάλυσης της έκφρασής τους, στους ρινικούς πολύποδες του ανθρώπου. Τα ευρήματα μας προτείνουν ένα πιθανό ρόλο κλειδί για τα ενεργοποιημένα μέλη της οικογένειας των γονιδίων ras, στα πλαίσια της συνεισφοράς τους στην εξέλιξη των NPs, καθώς επίσης και στην υπερτροφία των παρακείμενων ρινικών κογχών. Τα συμπεράσματα των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων RKIP και BRAF, αντικατοπτρίζουν την ισχυρή συσχέτιση που υπάρχει ανάμεσα τους. Το RKIP θα μπορούσε να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην μείωση της έκφρασης του αγρίου τύπου BRAF, δρώντας έτσι ως ενδογενής αναστολέας του σηματοδοτικού μονοπατιού MAPK στους ρινικούς πολύποδες και στον βλεννογόνο των παρακείμενων σε αυτούς ρινικών κογχών. Τα δεδομένα της μελέτης για την ύπαρξη ιών σε ρινικούς πολύποδες, επιβεβαιώνουν την υπόθεση ότι ο ιός HPV δεν συνδέεταιι συχνά με την εμφάνιση ρινοκολπικών πολυπόδων, και συσχετίζεται σε μικρότερο βαθμό με μολυσματικές βλάβες του βλεννογόνου, παρά με πολλαπλασιαστικές βλάβες. Αναφορικά με τον ιό EBV, το ποσοστό μόλυνσης δείχνει πως ο ρινικός βλεννογόνος ίσως να είναι από τα σημεία επιμονής του ιού EBV, και μπορεί να ευθύνεται για την εμφάνιση ρινικών όγκων που συσχετίζονται με ιούς, ενώ ο HSV δεν φαίνεται να εμπλέκεται στον σχηματισμό των ρινικών πολυπόδων.
Φυσική περιγραφή xvii, 172 σ. : πιν. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα Nasal Polyps
Oncogenes
Papillomavirus Infections
Πολύποδες μύτης
Ημερομηνία έκδοσης 2008-07-30
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Επιστημών Υγείας--Τμήμα Ιατρικής--Διδακτορικές διατριβές
  Τύπος Εργασίας--Διδακτορικές διατριβές
Εμφανίσεις 52

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 6