|
|
| Κωδικός Πόρου |
uch.biology.msc//1999politis |
| Τίτλος |
Βελτίωση της ανοσοσυγγένειας ανθρωπίνων αντισωμάτων με γενετική μηχανική |
| Συγγραφέας |
Πολίτης, Εμμανουήλ
|
| Περίληψη |
Το αντικείμενο της παρούσης διατριβής ήταν η μελέτη των μηχανισμών που διέπουν την ωρίμανση συγγένειας των αντισωμάτων. Για να προσεγγίσουμε το θέμα αυτό κρίθηκε απαραίτητη η επιλογή ενός ζεύγους αντισώματος-αντιγόνου των οποίων τις ιδιότητες αλληλεπίδρααης μελετήσαμε. Επιλέξαμε σαν αντιγόνο την βλεννίνη muc-1 που συναντάται σε αδενοκαρκίνους επιθηλιακών κυττάρων. Η βλεννίνη αυτή αποτελείται από επαναλαμβανόμενες μονάδες ενός εικοσαμερούς πεπτιδίου και ο σκελετός της θεωρείται σαν ένας από του πιο ορθολογικούς στόχους για τον εντοπισμό και θεραπεία των καρκίνων αυτής της μορφής. Σε προηγούμενες μελέτες [Henderikx et.al., 1998] απομονώθηκαν δυο αντισώματα σε μορφή scFv με ειδικότητα για το παραπάνω πεπτίδιο, αλλά με σχετικά χαμηλό βαθμό συγγένειας. Επιλέξαμε το αντίσωμα με την υψηλότερη ειδικότητα (10Α) και προκαλέσαμε τυχαίες μεταλλάξεις στις περιοχές CDR1 και CDR2 της βαριάς αλυσίδας του. Αφού έγινε η συγκρότηση των μεταλλαγμένων τμημάτων και η κλωνοποίηση σε φαγεμιδιακό φορέα, κατασκευάσθηκαν βιβλιοθήκες μεγέθους 5,6χ10^6 μελών με μεταλλαγές στην CDR1 περιοχή και 5,4χ10^6 με μεταλλαγές ταυτόχρονα στις CDR1 και CDR2 περιοχές. Μετά από την πραγματοποίηση δύο κύκλων επιλογών στις βιβλιοθήκες αυτές επιτύχαμε εμπλουτισμό σε scFv με ειδικότητα για το muc-1,48 φορές για την CDR1 βιβλιοθήκη και 149 φορές για την CDR1 - CDR2 βιβλιοθήκη. Από 60 αποικίες της εμπλουτισμένης CDR1 βιβλιοθήκης που ελέχθησαν, πήραμε 20 αποικίες (33%) με αυξημένη αντίδραση ως προς το αρχικό 10Α αντισώματα και αντίστοιχα 9 στις 60 (15%) στην περίπτωση της βιβλιοθήκης CDR1-CDR2. Δώδεκα αποικίες από τις δύο βιβλιοθήκες είναι της διαδικασίας της αλληλούχισης των scFv τους, ενώ υπό εξέλιξη βρίσκεται η διαδικασία αξιολόγησης της συγγένειας τους.
|
| Θέμα |
Sequencing, PCR, primer, degenerate primer, scFv, error prone PCR, atomic force microscope, phage display, signal peptide, alanine substitution, electroelution. |
| Ημερομηνία έκδοσης |
1999-11-01 |
| Ημερομηνία διάθεσης |
2000-01-20 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Εμφανίσεις |
213 |
Βελτίωση της ανοσοσυγγένειας ανθρωπίνων αντισωμάτων με γενετική μηχανική
