Περίληψη |
Το γονίδιο Fras1 αποτελεί το πρώτο μέλος της οικογένειας των Fras1/Frem-γονιδίων που απομονώθηκε και συσχετίστηκε με το φαινότυπο bleb στον ποντικό και το σύνδρομο Fraser, μια αυτοσωμική υπολειπόμενη γενετική ασθένεια του ανθρώπου. Η πρωτεΐνη που κωδικοποιεί εντοπίζεται στην εξωκυττάρια ύλη της βασικής μεμβράνης όλων των επιθηλιακών δομών του ποντικού κατά την εμβρυϊκή ανάπτυξη, ενώ δεν εντοπίζεται στη βασική μεμβράνη άλλων κυτταρικών τύπων. Η πλειονότητα των Fras1-/- εμβρύων πεθαίνει νωρίς κατά την εμβρυογένεση, ενώ ένα μικρό ποσοστό επιβιώνει και ενηλικιώνεται. Τα έμβρυα που πεθαίνουν εμφανίζουν υπο-επιδερμικές αιμορραγικές φουσκαλίδες στην κεφαλή και τα άκρα καθώς και δυσπλασία ή αγενεσία των νεφρών. Τα ενήλικα ομόζυγα παρουσιάζουν συνδακτυλία και συγχώνευση των οφθαλμικών βλεφάρων. Τα παθολογικά αυτά συμπτώματα εμφανίζονται και σε μια κατηγορία μεταλλαγμένων ποντικών, τα bleb καθώς επίσης και σε ασθενείς με σύνδρομο Fraser στον άνθρωπο. Μέχρι σήμερα έχουν εντοπιστεί δύο επιπλέον γονίδια ομόλογα του Fras1 (Frem1 και Frem2) των οποίων μεταλλάξεις σχετίζονται με τον bleb φαινότυπο, ενώ ένα τρίτο γονίδιο το Frem3, το οποίο δεν έχει χαρτογραφηθεί ακόμα, παρουσιάζει ομολογία με το Fras1, αλλά δεν έχει συσχετιστεί με τον bleb φαινότυπο. Στην παρούσα εργασία παρασκευάσθηκαν πολυκλωνικά αντισώματα για τις πρωτεΐνες Frem1, Frem2 και Frem3, τα οποία χρησιμοποιήθηκαν σε ανοσοϊστοχημικές μελέτες για τον εντοπισμό τους στις δομές του ποντικού σε διάφορα εμβρυϊκά στάδια. Η έκφραση των πρωτεϊνών ανιχνεύεται σε επιθηλιακές δομές, όπως και αυτή της Fras1, καθώς πρόκειται για πρωτεΐνες της ίδιας οικογένειας. Η Frem2 και Frem1 εμφανίζουν σχεδόν ίδιο πρότυπο έκφρασης, γεγονός που αποτελεί ένδειξη για την πιθανή αλληλεπίδρασή τους, ενώ η Frem3 ανιχνεύεται ενδοκυτταρικά, στις ίδιες περίπου επιθηλιακές δομές. Ο ανοσοϊστοχημικός εντοπισμός των πρωτεϊνών αυτών μπορεί να διαλευκάνει τους μηχανισμούς δράσης τους. Παράλληλα, πραγματοποιήθηκε απομόνωση cDNA του Frem3 με διερεύνηση φαγικών βιβλιοθηκών για την περαιτέρω χρήση του σε μελλοντικά πειράματα διαμόλυνσης κυττάρων και πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων.
|