Περίληψη |
Τις τελευταίες δεκαετίες μεγάλο ερευνητικό ενδιαφέρον έχουν
προσελκύσει βιολογικά μόρια όπως τα αμινοξέα, τα πεπτίδια και οι
πρωτεΐνες. Ο λόγος είναι πως τα μόρια αυτά είναι πολυδύναμα και
φέρουν πολλές ιδιότητες οι οποίες βρίσκουν εφαρμογή σε μεγάλο αριθμό
διαφορετικών πεδίων, ξεκινώντας από τα βιοϋλικά, τη φαρμακευτική και
τη βιοϊατρική και καταλήγοντας μέχρι τη βιομηχανία. Αυτό έχει ως
αποτέλεσμα τη ραγδαία ανάπτυξη του τομέα της βιοτεχνολογίας, καθώς
έχει αναπτυχθεί ένας μεγάλος αριθμός τεχνικών και μεθόδων για την
παραγωγή, την ανάλυση και τη μελέτη των ιδιοτήτων τέτοιων βιομορίων.
Η παρούσα εργασία αφιερώνεται στην παραγωγή και τη μελέτη των
ιδιοτήτων μια ειδικής ομάδας πρωτεϊνών, οι οποίες χαρακτηρίζονται ως
αντιψυκτικές. Οι πρωτεΐνες αυτές έχουν την ιδιότητα της ταπείνωσης του
σημείου πήξεως του νερού χωρίς να επηρεάζεται το σημείο τήξης του,
ένα φαινόμενο το οποίο ονομάζεται θερμική υστέρηση (ΤΗ). Οι πρωτεΐνες
αυτές συναντώνται κυρίως σε οργανισμούς (ψάρια, έντομα, φυτά,
μύκητες κ.α.), οι οποίοι ζουν σε ψυχρά κλίματα και τις παράγουν με
σκοπό την προστασία τους από τις χαμηλές θερμοκρασίες. Πιο
συγκεκριμένα θα μελετηθεί η αντιψυκτική πρωτεΐνη Rm6AF η οποία
προέρχεται από τρείς μεταλλάξεις στην αλληλουχία των αμινοξέων της
πρωτεΐνης Rm6 η οποία με τη σειρά της προέρχεται από μεταλλάξεις της
φυσικής πρωτεΐνης Repressor of primer (ROP).
Η παραγωγή της Rm6AF πραγματοποιήθηκε μέσω ενός ετερόλογου
συστήματος έκφρασης E.Coli, ενώ για την απομόνωσή της
χρησιμοποιήθηκαν δύο τεχνικές χρωματογραφίας, μία συγγένειας και
μία αποκλεισμού μεγεθών. Για τον προσδιορισμός της τριτοταγούς δομής
της πρωτεΐνης καθώς και τη θερμική σταθερότητά της χρησιμοποιήθηκε
η μέθοδος του κυκλικού διχρωισμού (CD). Η μελέτη των αντιψυκτικών
ιδιοτήτων έλαβε χώρα μέσω τριών διαφορετικών μεθόδων. Αρχικά
πραγματοποιήθηκαν πειράματα διαφορικής θερμιδομετρίας σάρωσης
(DSC), ώστε να υπολογιστή ο βαθμός της ΤΗ. Εν συνεχεία έλαβαν χώρα
πειράματα βιωσιμότητας σε βακτήρια E.Coli, ώστε να μελετηθεί η
αντιψυκτική προστασία που μπορεί να προσφέρει η πρωτεΐνη Rm6AF, σε
χαμηλές θερμοκρασίες για χρονικά διαστήματα έως 10 ημερών. Ενώ
τέλος χρησιμοποιήθηκε οπτική μικροσκοπία ώστε να μελετηθεί η
παρεμπόδιση της επανακρυστάλλωσης του πάγου, η οποία είναι μια
χαρακτηριστική ιδιότητα των αντιψυκτικών πρωτεϊνών και οφείλεται στην
προσρόφησή τους στα κρυσταλλικά επίπεδα του πάγου.
|