|
|
| Κωδικός Πόρου |
000426964 |
| Τίτλος |
Development of enzymatic molecular tools for RNA analysis |
| Άλλος τίτλος |
Ανάπτυξη ενζυμικών εργαλείων για ανάλυση RNA μορίων |
|
Συγγραφέας
|
Χεκήμογλου, Μαρία
|
|
Σύμβουλος διατριβής
|
Μπουριώτης, Βασίλης
|
| Περίληψη |
Η in vitro σύνθεση του RNA είναι μια διαδικασία απαραίτητη σε πολλές αναλυτικές τεχνικές της μοριακής βιολογίας. Πρόκειται για μία απλή μέθοδο που μπορεί να αποδώσει αρκετά mgs RNA απαιτώντας μόνο μία RNA πολυμεράση, ένα DNA εκμαγείο κάτωθεν ενός Τ7 υποκινητή, ριβονουκλεοτίδια και αναστολέα ριβονουκλεασών για την προστασία του συντιθέμενου μετάγραφου. Η παρούσα Μεταπτυχιακή Εργασία έχει στόχο την ανάπτυξη δύο μοριακών ενζυμικών εργαλείων για την ανάλυση RNA μορίων, την Τ7 RNA πολυμεράση και τον ανθρώπινο αναστολέα ριβονουκλεασών. Η υψηλή ειδικότητα της Τ7 RNA πολυμεράσης για τον Τ7 υποκινητή και η ικανότητά της να καταλύει τη μεταγραφή χωρίς την παρουσία συμπαραγόντων, καθιστούν το ένζυμο ιδανικό για την in vitro μεταγραφή. Τόσο ο καθαρισμός όσο και οι ποιοτικοί έλεγχοι για τη διασφάλιση της ποιότητας και λειτουργίας το ενζύμου διεξήχθησαν με επιτυχία και το προϊόν είναι εμπορικά διαθέσιμο από τη Minotech Biotechnology. Σε ότι αφορά τον αναστολέα ριβονουκλεασών, το ένζυμο που επιλέχθηκε είναι μια μεταλλαγή του ανθρώπινου αναστολέα ριβονουκλεασών ανθεκτική στην οξείδωση. Παρά την εκτεταμένη έρευνα για την εύρεση των κατάλληλων συνθηκών έκφρασης και καθαρισμού της πρωτεΐνης, η απομόνωση ενός λειτουργικού ενζύμου δεν επετεύχθη. Σημαντικός συντελεστής δυσκολίας είναι η παρουσία 31 καταλοίπων κυστεϊνης που καθιστούν το ένζυμο υδρόφοβο και ασταθές.
|
| Φυσική περιγραφή |
65 φύλλα : σχεδ., πίν., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ. |
| Γλώσσα |
Αγγλικά |
| Θέμα |
Biotechnology |
|
Enzyme assay |
|
In vitro transcription |
|
In vitro μεταγραφή |
|
Βιοτεχνολογία |
|
Ενζυμική αντίδραση |
| Ημερομηνία έκδοσης |
2019-11-29 |
| Συλλογή
|
Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
|
|
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
|
| Εμφανίσεις |
1207 |
Development of enzymatic molecular tools for RNA analysis
