E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Establishing a genetic tool for mosaic analysis in the red flour beetle T. castaneum

Αρχική Establishing a genetic tool for mosaic analysis in the red flour beetle T. castaneum

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000364436

Τίτλος

Establishing a genetic tool for mosaic analysis in the red flour beetle T. castaneum

Άλλος τίτλος

Η καθιέρωση ενός γενετικού εργαλείου για μωσαϊκή ανάλυση στο σκαθάρι T. castaneum

Συγγραφέας

Καλογεροπούλου Ελπινίκη

Σύμβουλος διατριβής

Αβέρωφ, Μιχάλης

Μέλος κριτικής επιτροπής

Δεληδάκης, Χρήστος
Τζαμαρίας, Δημήτρης

Περίληψη

Τα τελευταία χρόνια, νέα γενετικά εργαλεία έχουν καθιερωθεί που μας δίνουν τη δυνατότητα να μελετήσουμε λεπτομερώς τη λειτουργία γονιδίων, νευρωνικά δίκτυα και την αρχιτεκτονική του κυττάρου σε μια σειρά διαφορετικών ειδών. Στην παρούσα μεταπτυχιακή μου εργασία εστιάζω στην καθιέρωση του γενετικού εργαλείου brainbow στο σκαθάρι Tribolium castaneum. Το brainbow είναι μία κατασκευή που φέρει 4 διαφορετικές φθορίζουσες πρωτεΐνες και παραλλαγές των περιοχών lox, τα οποία πλαισιώνουν την κάθεμιά απο αυτές. Σε ένα διαγενετικό ζώο που φέρει το brainbow αλλά συνάμα εκφράζει και τη cre ρεκομπινάση, οι περιοχές lox ανασυνδυάζονται τυχαία. Αυτό οδηγεί στη δημιουργία κλώνων κυττάρων, που σημαίνονται γενετικά με τις διαφορετικές φθορίζουσες πρωτεΐνες. Το brainbow εισήγαγε η Livet et al, το 2007 και εκφράζονταν επιλεκτικά στο ΚΝΣ των ποντικιών. Στην παρουσα εργασία έκανα την πρώτη προσπάθεια να στοχεύσω την ευρεία έκφραση του brainbow στο Tribolium castaneum. Εάν επιτυχής, τα κύτταρα πρέπει να μαρκαριστούν με τις διαφορετικές φθορίζουσες πρωτεΐνες, έτσι ώστε οι απόγονοί τους να μπορούν να ακολουθηθούν in vivo, επιτρέποντας σε μας να ερευνήσουιτ^ πώς η ζώνη ανάπτυξης (growth zone) επιμηκύνεται και πώς τα μεταμερή δημιουργούνται στο Tribolium castaneum. Παρήγαγα δύο διαφορετικούς τύπους διαγενετικών σκαθαριών, ο ένας φέρνει μία κατασκευή εκφράζοντας τη cre ρεκομπινάση (οκτώ strains συνολικά) και ο άλλος φέρνει την κατασκευή brainbow (τρία strains). Έπειτα απο διασταύρωση των διαγενετικών τύπων, cre και brainbow, εξετάστηκε με τη μέθοδο της PCR και την μικροσκοπία ο επιτυχής ανασυνδυασμός των κατασκευών. Οι αντιδράσεις PCR υπέδειξαν ότι το σύστημα cre/lox λειτουργεί στο Tribolium castaneum. Ο ανασυνδυασμός μεταξύ των διάφορων περιοχών lox συμβαίνει. Επιπλέον, η ομοεστιακή μικροσκοπία (confocal) αποκάλυψε κλώνους κυττάρων που φθορίζανε στο κόκκινο χρώμα, ως αποτέλεσμα του ανασυνδυασμού μεταξύ ενός από τα ζευγάρια των περιοχών lox. Εντούτοις, οι παρατηρηθέντες κλώνοι είναι λίγοι, σπάνιοι και πολύ μικροί. Τα αποτελέσματα επίσης δείχνουν ότι ο heat shock promoter που χρησιμοποιείται για να επάγει την έκφραση της cre ρεκομπινάσης είναι leaky.

Φυσική περιγραφή

25 σ. : πίν., έγχ. εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Brainbow

Cre/lox

Multicolour imaging

Transgenesis

Tribolium castaneum

Ημερομηνία έκδοσης

2011-03-18