Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Απομόνωση και πρωτεομική ανάλυση των ετεροκυστών από το κυανοβακτήριο Anabaena sp. PCC 7120  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000388636
Τίτλος Απομόνωση και πρωτεομική ανάλυση των ετεροκυστών από το κυανοβακτήριο Anabaena sp. PCC 7120
Άλλος τίτλος Isolation and proteomic analysis of heterocysts from cyanobacteria Anabaena sp.PCC7120.
Συγγραφέας Μαναρωλάκη, Ευτυχία Σ
Σύμβουλος διατριβής Τσιώτης, Γεώργιος
Μέλος κριτικής επιτροπής Γανωτάκης, Δημήτριος
Κοτζαμπάσης, Κυριάκος
Περίληψη Το Anabaena sp.PCC7120 ανήκει στην κατηγορία των αρνητικών κατά Gram κυανοβακτηρίων, το οποίο έχει την ικανότητα να επιτελεί οξυγονική φωτοσύνθεση αλλά και καθήλωση αζώτου. Ένα από τα κυριότερα χαρακτηριστικά αυτού του βακτηρίου, είναι η κυτταρική πολυπλοκότητα, λόγω της ανάπτυξης δύο ειδών κυττάρων (αγενή κύτταρα και ετεροκύστες). Συγκεκριμένα ο ανθεκτικός κυτταρικός τύπος των ετεροκυστών, σε συνθήκες στέρησης αζώτου παράγει μοριακό υδρογόνο. Η διερεύνηση της διαφοροποίησης ή μη των κυττάρων σε ετεροκύστες κατά τη στέρηση, πραγματοποιήθηκε με το να αναπτυχθεί το βακτήριο για πέντε ημέρες σε θρεπτικό μέσο BG11 και στη συνέχεια άλλες δυο ημέρες σε θρεπτικό μέσο BG11o. Η παρούσα εργασία επικεντρώθηκε στην εφαρμογή πρωτοκόλου απομόνωσης των ετεροκυστών και στην πραγματοποίηση δυο προσεγγίσεων για την πρωτεομική τους μελέτη. Με την πρώτη προσέγγιση επετεύχθει επιλεκτική διαλυτοποίηση της εσωτερικής μεμβράνης των απομονωμένων ετεροκυστών με ανιοντικό επιφανειοδραστικό, για τέσσερα διαφορετικά στελέχη του βακτηρίου (WTPCC7120, hupL- , hoxH-, hupL- / hoxH-). Για την ανάλυση και το χαρακτηρισμό τους,στα κλάσματα που προέκυψαν, το διαλυτοποιημένο και το μη διαλυτοποιημένο εφαρμόστηκε δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση Tricine SDS PAGE και τα πρωτεϊνικά στίγματα που διακρίθηκαν ταυτοποιήθηκαν με φασματομετρία μάζας. Οι διαφορές στην έκφραση των πρωτεϊνών στα διαφορετικά στελέχη ήταν εμφανής. Ταυτοποιήθηκαν βασικές πρωτείνες των μεταβολικών μονοπατικών για την ανάπτυξη και επιβίωση των ετεροκυστών όπως η All2269, Αlr4550 και η Alr2887, με μεγαλύτερο ποσοστό στο στέλεχος που δεν είναι γενετικά τροποποιημένο. O αριθμός των πρωτεινών μειώνεται για τα υπόλοιπα στελέχη και παρατηρούμε και την έκφραση μοναδικών πρωτεϊνών σε αυτά. Με τη δεύτερη προσέγγιση αναλύθηκαν πρωτεομικά, ολόκληρες οι ετεροκύστες, χωρίς να έχει προηγηθεί διάρηξη των εξωτερικών μεμβρανών με τις μεμβράνες των θυλακοειδών και την κυτταροπλασματική μεμβράνη. Η δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση των απομονωμένων ετεροκυστών του βακτηρίου πραγματοποιήθηκε με 2DE IEF/SDS-PAGE. Η διαδικασία έδειξε επιτυχή διαχωρισμό των μεμβρανικών πρωτεϊνών, εφόσον το ποσοστό που ταυτοποιήθηκαν ήταν ίσο με το ποσοστό των κυτταροπλασματικών πρωτεϊνών. Επιπλέον στη δεύτερη μέθοδο ταυτοποιήθηκαν πρωτείνες που εμπλέκονται στη διαφοροποίηση των αγενών κυττάρων σε ετεροκύστες όπως και στην πρώτη προσέγγιση. Αυτό μας επέτρεψε να εκτιμήσουμε ότι η απομόνωση τους επετεύχθει ως ένα βαθμό και έτσι να προσπαθήσουμε να κατανοήσουμε καλύτερα των μεταβολισμό τους και την πρωτεομική σύνθεση και λειτουργία μιας ενιαίας εξωτερικής μεμβράνης για τα δυο είδη κυττάρων. Επιπροσθέτως μελετήθηκε η παραγωγή υδρογόνου από τα στελέχη του κυττάρου και παρατηρήθηκε σημαντικά υψηλότερη ποσότητα για το στέλεχος hupL-.
Φυσική περιγραφή 114 φύλλα : πίν., εικ. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα Ετεροκύστες
Κυανοβακτήρια
Ημερομηνία έκδοσης 2014-11-21
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Χημείας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 104

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 44