Περίληψη |
Ο σκοπός της εργασίας που περιγράφεται σε αυτή τη διατριβή απέβλεπαν στην ανάπτυξη της τεχνολογίας των μικροσυστοιχιών και εφαρμογή νέων μεθόδων και εργαλείων αφενός και αφεταίρου στην εφαρμογή της στην απάντηση βασικών βιολογικών ερωτημάτων. Αρχικά, παρουσιάζεται η ανάπτυξη τριών μεθοδολογιών για την ανάλυση εικόνας από μικροσυστοιχίες που αυξάνουν την
επαναληψιμότητα των παραγόμενων αποτελεσμάτων, καθώς και την αύξηση της δυναμικής διακύμανσής τους. Στην επόμενη ενότητα, με τη χρήση μικροσυστοιχιών αναλύεται η in vivo συμμετοχή του βασικού μεταγραφικού συμπλόκου TFIID στη μεταγραφή ηπατοκυττάρων σε διαφορετικά αναπτυξιακά στάδια. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης έδειξαν ότι το TFIID είναι απαραίτητο μόνο κατά τη μεταγραφική έναρξη και όχι στα επόμενα στάδια της μεταγραφής. Επίσης αποκάλυψε για πρώτη φορά τη συμμετοχή του συμπλόκου
στη μεταγραφική σίγηση γονιδίων που εκφράζονταν σε προηγούμενα στάδια. Κατόπιν, η εστίαση των ερευνών αλλάζει από τη βασική μεταγραφική μηχανή στους μεταγραφικούς παράγοντες και τις απαιτήσεις τους. Με την κατασκευή μικροσυστοιχίας που περιέχει μικρό αριθμό επιλεγμένων γονιδίων εξετάσαμε τη διαφορική πρόσδεση του μεταγραφικού παράγοντα Gcn4 του σακχαρομύκητα
στα γονίδια-στόχους του και τις διαφορές στις απαιτήσεις για μεταγραφική ενεργοποίηση των περιοχών ενεργοποίησης του Gal4 και του Gcn4 μεταγραφικού παράγοντα. Η ανάλυση έδειξε διαφορετικές απαιτήσεις των περιοχών ενεργοποίησης για υπομονάδες του συμπλόκου SAGA και προτάθηκαν πιθανές εξηγήσεις. Η μεταγραφική ρύθμιση είναι πιο σύνθετη από την απλή αλληλεπίδραση μεταγραφικών παραγόντων με τη μεταγραφική μηχανή.
Μετά αναλύθηκε η επίδραση της Rad9, μιας πρωτεΐνης που παίζει ρόλο στην απάντηση σε καταστροφή του DNA, στη μεταγραφική ρύθμιση συγκεκριμένων μονοπατιών στο σακχαρομύκητα. Η φυσική παρουσία της πρωτεΐνης σε ρυθμιζόμενα γονίδια υπονοεί ότι η μεταγραφική ρύθμιση είναι άρρηκτα συνδεδεμένη με την απόκριση σε καταστροφή του DNA. Τέλος, κατασκευάστηκε μια μικροσυστοιχία από μια cDNA βιβλιοθήκη του φυτού Cistus creticus. Αυτή χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση γονιδίων που υπερεκφράζονται ή εκφράζονται αποκλειστικά στα τριχώματα, σε μια προσπάθεια να αναγνωριστούν γονίδια που είναι υπεύθυνα για την βιοσύνθεση μεταβολιτών που παράγονται
στα τριχώματα με σημαντικές φαρμακευτικές ιδιότητες. Από τα πιθανά ιστο-ειδικά εκφραζόμενα γονίδια, το γονίδιο που σχετίζεται με δευτερογενή μεταβολισμό απομονώθηκε και χαρακτηρίστηκε ως μια συνθάση Β γερμακρενίου, ενός σημαντικού ενζύμου για τη βιοσύνθεση των ενεργών μεταβολιτών. Στα επιμέρους κεφάλαια, πριν τα αποτελέσματα, περιλαμβάνεται μια σύντομη εισαγωγή για τα
αντίστοιχα ερευνητικά ερωτήματα.
|