E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Employing CRISPR/Cas9 to study the GLUD1 and /or GLUD2 knock out effect on HEK293 cell cultures

Αρχική Employing CRISPR/Cas9 to study the GLUD1 and /or GLUD2 knock out effect on HEK293 cell cultures

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000402145

Τίτλος

Employing CRISPR/Cas9 to study the GLUD1 and /or GLUD2 knock out effect on HEK293 cell cultures

Άλλος τίτλος

Χρήση του CRISPR/Cas9 για τη μελέτη της επίδρασης που προκαλεί η απαλοιφή του GLUD1 ή/και του GLUD2 γονιδίου σε HEK293 κυτταροκαλλιέργειες

Συγγραφέας

Κοσμοπούλου Χριστίνα

Σύμβουλος διατριβής

Ζαγανάς, Ιωάννης

Μέλος κριτικής επιτροπής

Καραγωγέως, Δόμνα
καρδάσης, Δημήτριος

Περίληψη

Θεωρητικό υπόβαθρο: Η γλουταμικό αφυδρογονϊςη (GDH) εύναι ϋνα μιτοχονδριακό ϋνζυμο που βρύςκεται ςε αφθονύα και καταλύει την αντιςτρϋψιμη αλληλομετατροπό του γλουταμικού ςε α-κετογλουταρικό και αμμωνύα χρηςιμοποιώντασ το NADP(H) και το NAD(H) ςαν ςυμπαρϊγοντεσ. Στα θηλαςτικϊ, η GDH πιςτεύεται ότι ευνοεύ την παραγωγό του α-κετογλουταρικού το οπούο ςτη ςυνϋχεια χρηςιμοποιεύται για παραγωγό ενϋργειασ μϋςω τησ ειςόδου του ςτον κύκλο του Krebs. Στουσ ανθρώπουσ, η GDH κωδικοποιεύται από δύο γονύδια, το GLUD1 και το GLUD2, τα οπούα ϋχουν μεγϊλη ομολογύα. Στόχοσ τησ μελέτησ: Ο ςτόχοσ αυτόσ τησ μελϋτησ όταν να εξεταςτεύ η επύδραςη που ϋχει η απαλοιφό τησ GLUD1 ό τησ GLUD2 (ό και τον δύο), που πραγματοποιόθηκε ςε ανθρώπινεσ κυτταρικϋσ ςειρϋσ, ςτην κυτταρικό βιωςιμότητα και τον μεταβολιςμό. Μέθοδοι: Στην παρούςα μελϋτη, χρηςιμοποιόςαμε το CRISPR/Cas9 ςύςτημα (ϋνα νϋο εξαιρετικϊ αποδοτικό ςύςτημα που χρηςιμοποιεύται ολοϋνα και περιςςότερο για την εξϊλειψη γονιδύων) προκειμϋνου να απαλεύψουμε εύτε και τα δύο, εύτε ϋνα εκ των GLUD1 και GLUD2 γονιδύων κϊθε φορϊ, ςε HEK293 κυτταροκαλλιϋργειεσ. Για το λόγο αυτό, ςχεδιϊςτηκαν δύο ζεύγη ςυμπληρωματικών μονόκλωνων RNA (sgRNAs) ειδικϊ για την hGDH1 και δύο ζεύγη ειδικϊ για την hGDH2. Στη ςυνϋχεια, κϊθε sgRNA κλωνοποιόθηκε ςτον pX458 πλαςμιδιακό φορϋα ο οπούοσ περιϋχει το γονύδιο Cas9. Αποτελέςματα και ςυζήτηςη: Λόγω του περιοριςμϋνου χρόνου, δεν καταφϋραμε να φτϊςουμε ςτο ςτϊδιο τησ ϋκφραςησ αυτών των πλαςμιδύων ςε ΗΕΚ293 κύτταρα (η διαδικαςύα αυτό πραγματοποιεύται αυτό τον καιρό). Ο τελικόσ ςτόχοσ εύναι η μελϋτη τησ κυτταρικόσ βιωςιμότητασ και του μεταβολικού προφύλ ΗΕΚ293 κυττϊρων από τα οπούα ϋχουν προηγουμϋνωσ εξαλειφθεύ οι hGDHs.

Φυσική περιγραφή

47 σ. : εικ.(μερ. εγχρ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Γλουταμική αφυδρογονάση

Ημερομηνία έκδοσης

2016-07-19

Συλλογή

Σχολή/Τμήμα--Ιατρική Σχολή--Τμήμα Ιατρικής--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Εμφανίσεις

265

Ψηφιακά τεκμήρια
	Κατέβασμα Εγγράφου Προβολή Εγγράφου Εμφανίσεις : 48