E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Μελέτη πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου ΙΙΙ στο φυτοπαθογόνο Pseudomonas syringae pv phaseolicola

Αρχική Μελέτη πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου ΙΙΙ στο φυτοπαθογόνο Pseudomonas syringae pv phaseolicola

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000419705

Τίτλος

Μελέτη πρωτεϊνών του εκκριτικού συστήματος τύπου ΙΙΙ στο φυτοπαθογόνο Pseudomonas syringae pv phaseolicola

Άλλος τίτλος

Study of proteins of type III secretion system in plant pathogen Pseudomonas syringae pv phaseolicola

Συγγραφέας

Λαγκουβάρδος, Μιχάλης Ε.

Σύμβουλος διατριβής

Καλαντίδης, Κρίτων

Μέλος κριτικής επιτροπής

Κοκκινίδης, Μιχαήλ
Αϊβαλιώτης, Μιχαήλ

Περίληψη

Η αλληλεπίδραση παθογόνων βακτηρίων – ξενιστή αποτελεί ένα σημαντικό πεδίο έρευνας τα τελευταία χρόνια. Στα τέλη της δεκαετίας του 1980 περιγράφηκαν τα πρώτα γονίδια τα οποία βρέθηκε μεταγενέστερα ότι κωδικοποιούσαν για μία πολύπλοκη δομή έκκρισης, που ονομάστηκε εκκριτικό σύστημα τύπου ΙΙΙ. Όταν το βακτήριο αλληλεπιδράσει φυσικά με το κύτταρο – στόχο (ξενιστή), η συσκευή αυτή είναι ικανή να μεταφέρει παράγοντες παθογένειας στον ξενιστή με την μεταφορά αυτή να γίνεται από το κυτταρόπλασμα του βακτηρίου απευθείας στο κυτταρόπλασμα του ξενιστή. Μάλιστα, στις περιπτώσεις φυτοπαθογόνων βακτηρίων, η συσκευή έκκρισης τύπου ΙΙΙ διαπερνά και το κυτταρικό τοίχωμα του φυτικού κυττάρου ξενιστή. Η παρούσα μελέτη εστίασε σε δύο πρωτεΐνες της εκκριτικής μηχανής του φυτοπαθογόνου βακτηρίου Pseudomonas syringae pv phaseolicola, που προκαλεί ασθένεια με συμπτώματα κηλίδωσης στο Phaseolus vulgaris (κοινή φασολιά). Συγκεκριμένα, μελετήθηκαν οι πρωτεΐνες HrpO και HrpE, οι οποίες πιστεύεται ότι δημιουργούν σύμπλοκο. Αυτές οι πρωτεΐνες παρουσιάζουν ομολογία με τις FliJ και FliH του βακτηριακού μαστιγίου. Η FliJ είναι βοηθητική πρωτεΐνη (chaperone) και η FliH αρνητικός ρυθμιστής της ATPάσης. Ο πλασμιδιακός φορέας pET26b χρησιμοποιήθηκε για την δημιουργία μια κατασκευής που περιείχε στη σειρά τα γονίδια των HrpO, HrpE (μαζί με ένα κατάλοιπο ιστιδινών His – tag μετά την HrpE) καθώς και ενός φορέα με την έκφραση μόνο του HrpO. Ο φορέας που περιελάμβανε τις δύο πρωτεΐνες σε σειρά, χρησιμοποιήθηκε για τον μετασχηματισμό βακτηριακών κυττάρων Escherichia coli και το υπό εξέταση σύμπλοκο απομονώθηκε επιτυχώς. Στην συνέχεια, ακολούθησαν πειράματα κυκλικού διχρωισμού με σκοπό την συλλογή στοιχείων για τα δομικά χαρακτηριστικά του υπό εξέταση συμπλόκου. Συγκριτικά, πραγματοποιήθηκαν πειράματα κυκλικού διχρωισμού και για τις μεμονωμένες πρωτεΐνες. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι: α) οι δύο πρωτεΐνες σχηματίζουν σύμπλοκο το οποίο μπορεί να καθαριστεί από στήλη νικελίου αγαρόζης, β) το υπό εξέταση σύμπλοκο εμφανίζει υψηλά ποσοστά α – έλικας, όπως και οι μεμονωμένες HrpO/HrpE. Συμπερασματικά, μπορούμε να υποθέσουμε την ύπαρξη ενός συμπλόκου μεταξύ των δύο πρωτεϊνών, το οποίο ωστόσο είναι ασταθές και προκαλεί δομικές αλλαγές στις επιμέρους πρωτεΐνες κατά τον σχηματισμό του.

Φυσική περιγραφή

46 φύλλα : σχεδ., πίν., εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Circular dichroism

Complex

HrpE

HrpO

Type III secretion system

Κυκλικός δι-χρωισμός

Σύμπλοκο