Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Έλεγχος της λειτουργικότητας δύο μοριακών εργαλείων για την έκφραση γονιδίων από κοινό υποκινητή στο είδος Parhyale hawaiensis  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Τίτλος Έλεγχος της λειτουργικότητας δύο μοριακών εργαλείων για την έκφραση γονιδίων από κοινό υποκινητή στο είδος Parhyale hawaiensis
Συγγραφέας Καμπράνη, Ελένη
Σύμβουλος διατριβής Αβέρωφ, Μιχαήλ
Περίληψη Η ανάπτυξη νέων οργανισμών-μοντέλων είναι απαραίτητη για τη σύγκριση των πληροφοριών που προκύπτουν από μελέτες στα καθιερωμένα μοντέλα (D. melanogaster, C. elegans, ποντίκι) αλλά και για την κατανόηση της εξέλιξης των ειδών. Σημαντικό βήμα προς αυτή την κατεύθυνση αποτελεί η ανάπτυξη γενετικών εργαλείων για το χειρισμό των οργανισμών αυτών. Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι η ανάπτυξη γενετικών εργαλείων για την έκφραση δύο γονιδίων υπό τον έλεγχο ενός κοινού υποκινητή, στο αμφίποδο Parhyale hawaiensis. Για το λόγο αυτό ακολουθήθηκαν δύο προσεγγίσεις, η χρήση 1. Της εσωτερικής θέσης έναρξης της μετάφρασης, IRES, του ιού RhPV, 2. του πεπτιδίου 2Α του ιού του αφθώδους πυρετού (foot-and-mouth virus, FMV). Χρησιμοποιώντας δυο διακριτές φθορίζουσες πρωτεΐνες GFP και RFP κάτω από τον έλεγχο του ίδιου υποκινητή, έλεγξα για την ικανότητα των IRES και 2A να επάγουν την έκφραση του δεύτερου σε σειρά γονιδίου. Κατασκευάσθηκαν δύο πλασμιδιακές κατασκευές 1) pMi-{3xP3-EGFP-SV40; ph-MS-GFP-IRES-DsRed-SV40}, 2) pMi-{3xP3-EGFP-SV40- phHS-lyndTomato-2A-H2B-GFP-SV40} οι οποίες στη συνέχεια ενέθηκαν σε έμβρυα στο στάδιο του ενός και δύο κυττάρων. Έπειτα από μικροσκοπική παρατήρηση των μετασχηματισμένων ατόμων διαπιστώθηκε ότι το στοιχείο IRES του ιού RhPV δεν είναι ενεργό στο αμφίποδο καθώς μόνο το προϊόν του πρώτου γονιδίου (GFP) ήταν ανιχνεύσιμο. Αντίθετα, το ιικό πεπτίδιο 2Α παρουσίασε υψηλά επίπεδα έκφρασης και των δύο γονιδίων και επομένως θα είναι χρήσιμο εργαλείο για μελλοντικά πειράματα στο αμφίποδο. Τέλος, ταυτοποιήθηκε και το σήμα για μεμβρανική στόχευση που δίνει η αλληλουχία lyn στα κύτταρα του Parhyale.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα
IRES
Εσωτερική θέση έναρξης της μετάφρασης
Πεπτίδιο 2Α
Ημερομηνία έκδοσης 2012-02-01
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Πτυχιακές εργασίες
  Τύπος Εργασίας--Πτυχιακές εργασίες
Εμφανίσεις 36

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 3