E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Μελέτη των πρωτεϊνικών συμπλόκων και των ισομορφών της πρωτεΐνης TP53 σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές-μοντέλα του ανθρώπινου λεμφώματος πριν και μετά τη Ν3a επαγόμενη ενεργοποίησή της

Αρχική Μελέτη των πρωτεϊνικών συμπλόκων και των ισομορφών της πρωτεΐνης TP53 σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές-μοντέλα του ανθρώπινου λεμφώματος πριν και μετά τη Ν3a επαγόμενη ενεργοποίησή της

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000443253

Τίτλος

Μελέτη των πρωτεϊνικών συμπλόκων και των ισομορφών της πρωτεΐνης TP53 σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές-μοντέλα του ανθρώπινου λεμφώματος πριν και μετά τη Ν3a επαγόμενη ενεργοποίησή της

Άλλος τίτλος

Study of protein complexes and isoforms of TP53 protein in different cell lines-models of human lymphoma before and after N3a induced activation

Συγγραφέας

Γεροπούλου, Νικολέτα Κ.

Σύμβουλος διατριβής

Αϊβαλιώτης, Μιχαήλ
Παυλίδης, Ιωάννης

Μέλος κριτικής επιτροπής

Περγαντής, Σπυρίδων

Περίληψη

Το λέμφωμα αποτελεί τη συνηθέστερη αιματολογική κακοήθεια που επηρεάζει τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος και διακρίνεται σε δύο κύριες ομάδες, το Hodgkin (HL) και το μη Hodgkin λέμφωμα (NHL). Στις περισσότερες περιπτώσεις λεμφώματος, η p53 είναι άγριου τύπου (wt) αλλά απενεργοποιείται από μια υπερεκφραζόμενη πρωτεΐνη, την Mouse double minute 2 homolog (MDM2). Η χρήση της Nutlin-3a (χημικός ανταγωνιστής της MDM2) στα λεμφώματα, κυρίως προάγει την απόπτωση, μέσω της επανενεργοποίησης της πρωτεΐνης p53, αποτελώντας μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στρατηγική. Παρόλα αυτά, υπάρχουν τουλάχιστον 12 πρωτεϊνικές ισομορφές της p53 με διαφορές στο μέγεθος και σε μικρότερο βαθμό στην αλληλουχία αμινοξέων, με ασαφή ακόμη ρόλο στα λεμφώματα και στη λειτουργία της p53. Οι ισομορφές αυτές έχουν βρεθεί μέχρι σήμερα να καθορίζουν και να ρυθμίζουν τις διαφορετικές δράσεις της p53 (μεταγραφική ρύθμιση, πρωτεϊνικές αλληλεπιδράσεις κ.ά). Χαρακτηριστικά παραδείγματα αποτελούν η p53β, η οποία σχηματίζει πρωτεϊνικό σύμπλοκο με την p53 και ενισχύει τη μεταγραφική ενεργότητά της, αλλά και η Δ133p53, με την παρουσία της οποίας αναστέλλεται ισχυρά η αποπτωτική δράση της p53.Στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση των ισομορφών της wt-p53, καθώς και η ανίχνευση των πρωτεϊνικών συμπλόκων στα οποία εμπλέκονται, σε κύτταρα του ανθρώπινου λεμφώματος κατά της Ν3a επαγώμενης ενεργοποίησης της p53. Για την εκπόνηση της παρούσας εργασίας χρησιμοποιήθηκαν κυτταρικές σειρές-μοντέλα του ανθρώπινου λεμφώματος, όπου διαμέσου κυτταροκαλλιεργειών τα κύτταρα ανέπτυξαν τον επιθυμητό αριθμό κυττάρων και επωάστηκαν με και χωρίς Ν3a. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε επώαση με φορμαλδεϋδη με στόχο τη μονιμοποίηση των πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων, καθώς και κυτταρική λύση για την απομόνωση του πρωτεϊνώματός τους. Έπειτα από προσδιορισμό της πρωτεϊνικής τους συγκέντρωσης με τη μέθοδο BCA, τα πρωτεϊνικά εκχυλίσματα, υποβλήθηκαν σε ανοσοαποτύπωση κατά Western (immunoblotting), κάνοντας χρήση αντισωμάτων, τόσο για την p53 και τις ισομορφές της, όσο και για την p21, που αποτελεί στόχο ενεργοποίησης της p53 και την MDM2 που αποτελεί αρνητικό ρυθμιστή της. Με ειδική επεξεργασία δεδομένων, ανιχνεύθηκε και ποσοτικοποιήθηκε, αφενός ο ολιγομερισμός της p53 πριν και μετά τη N3a, καθώς και η συμμετοχή της σε σύμπλοκα, και αφετέρου αξιολογήθηκε η ύπαρξη και η σχετική αφθονία των ισομορφών διαφορετικού μοριακού βάρους της wt-p53, σε λέμφωμα κυττάρων του μανδύα. Επιβεβαιώθηκε η αύξηση ολιγομερισμού της p53 μετά την προσθήκη της N3a, που συνάδει με τον τετραμερισμό της, αλλά και η ταυτοποίηση των ισομορφών της p53 με βάση το μοριακό τους βάρος, χωρίς όμως να καταφέρουμε να διαχωρίσουμε με ευκρίνεια τις ισομορφές α,β και γ. Οι ισομορφές α, β, και γ θα μελετηθούν περαιτέρω σε μελλοντικά πειράματα με τη χρήση φασματομετρίας μάζας.

Φυσική περιγραφή

173 σ. : πίν., σχήμ., εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Immunoblotting

Isoforms

Lymphoma

MDM2

Mantle cell lymphoma

Nutlin-3a

p21