Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Κλωνοποίηση και έκφραση του γονιδίου bc3461 από τον οργανισμό Bacillus cereus: απομόνωση του ανασυνδυασμένου ενζύμου  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου uch.biology.msc//2006spiliotopoulou
Τίτλος Κλωνοποίηση και έκφραση του γονιδίου bc3461 από τον οργανισμό Bacillus cereus: απομόνωση του ανασυνδυασμένου ενζύμου
Συγγραφέας Σπηλιωτοπούλου, Παναγιώτα
Σύμβουλος διατριβής Μπουριώτης, Βασίλειος
Περίληψη Η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκε στο εργαστήριο Ενζυμικής Βιοτεχνολογίας του τμήματος Βιολογίας του Πανεπιστημίου Κρήτης και εστιάσθηκε στην απομόνωση της πρωτεΐνης BC3461 από τον οργανισμό Bacillus cereus. Η πρωτεΐνη αυτή μαζί με την BC1534 είναι οι δυο πρωτεΐνες του B.cereus που σύμφωνα με την αμινοξική τους αλληλουχία κατατάσσονται στην οικογένεια πρωτεϊνών LmbE, η οποία δεν είναι καλά χαρακτηρισμένη. Η BC1534 έχει ήδη απομονωθεί και έχει δειχθεί η δυνατότητα της να απακετυλιώνει χιτοολιγομερή και μονομερές N-ακετυλγλυκοζαμίνης (Deli et al, unpublished results). Οι δυο πρωτεΐνες παρουσιάζουν μεγάλη ομολογία σε συντηρημένα κατάλοιπα με αποτέλεσμα να εικάζεται οτι η πρωτεΐνη BC3461 έχει δραστικότητα απακετυλάσης σε χιτοολιγομερή και η οποία πιθανόν να συμμετέχει, μαζί με την BC1534, σε ένα απλό μονοπάτι αποικοδόμησης της χιτίνης σε γλυκοζαμίνη. Τα γονίδια επίσης που κωδικοποιούν για τις παραπάνω δυο πρωτεΐνες παρουσιάζουν μεγάλη ομολογία με αντίστοιχα γονίδια στο γένωμα του B. αnthracis ενός βακτηρίου το οποίο είναι παθογόνο και το οποίο έχει χρησιμοποιηθεί και ως βιολογικό όπλο. Έτσι το μη παθογόνο βακτήριο B. cereus μπορεί να αποτελέσει μοντέλο για τη μελέτη γονιδίων που υπάρχουν στο B. anthracis. Παρά τις πολλές και διαφορετικές προσπάθειες, η απομόνωση της BC3461 δεν στάθηκε δυνατή. Αν και το γονίδιο κλωνοποιήθηκε έτσι ώστε το ένζυμο για το οποίο κωδικοποιεί να φέρει είτε έξι κατάλοιπα ιστιδίνης (His-tag) στο C-τελικό άκρο, είτε έξι κατάλοιπα ιστιδίνης στο Ν-τελικό άκρο ή χωρίς κάποιον επίτοπο, με καμιά από αυτές τις διαφορετικές πλασμιδιακές κατασκευές, δεν στάθηκε δυνατή η εύρεση ενός σχήματος καθαρισμού για την πρωτεΐνη BC3461. Στην εργασία που ακολουθεί περιγράφονται αναλυτικά όλες οι προσπάθειες που πραγματοποιήθηκαν για την υπερπαραγωγή και απομόνωση της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας καθεμία από τις τρεις πλασμιδιακές κατασκευές που αναφέρθηκαν παραπάνω. Επιπλέον πραγματοποιήθηκε ένα πείραμα προκειμένου να μελετηθεί αν η έκφραση του γονιδίου bc3461 στον B. cereus, επάγεται από πιθανά υποστρώματα του αντίστοιχου ενζύμου.
Γλώσσα Ελληνικά
Ημερομηνία έκδοσης 2006-11-27
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 35

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 3