E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Development of an assay for the detection of sickle cell point mutation

Αρχική Development of an assay for the detection of sickle cell point mutation

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000468891

Τίτλος

Development of an assay for the detection of sickle cell point mutation

Άλλος τίτλος

Ανάπτυξη πρωτοκόλλου για την ανίχνευση της σημειακής μεταλλαγής που προκαλεί τη δρεπανοκυτταρική αναιμία

Συγγραφέας

Βισκαδουράκη, Ευγενία Στεφανία Β.

Σύμβουλος διατριβής

Γκιζελή, Ηλέκτρα
Γαλανοπούλου, Αναστασία

Μέλος κριτικής επιτροπής

Παυλίδης, Ιωάννης
Αθανασάκη, Ειρήνη

Περίληψη

Οι αιμοσφαιρινοπάθειες συνιστούν μια πολύπλοκη ομάδα κληρονομικών διαταραχών, οι οποίες χαρακτηρίζονται από τη μειωμένη σύνθεση μιας ή περισσοτέρων αλυσίδων αιμοσφαιρίνης ή από τη σύνθεση μια δομικά ανώμαλης αιμοσφαιρίνης. Η δρεπανοκυτταρική αναιμία αποτελεί μια αυτοσωμική υπολειπόμενη αιμοσφαιρινοπάθεια, η οποία οφείλεται σε μια σημειακή μετάλλαξη που οδηγεί στην αντικατάσταση ενός νουκλεοτιδίου (θυμίνη σε αδενίνη) στο 6ο κωδικόνιο του γονιδίου που κωδικοποιεί την αλυσίδα β της αιμοσφαιρίνης (HBB). Η συχνότητα εμφάνισης αυτής της γενετικής διαταραχής είναι ιδιαίτερα υψηλή σε περιοχές της Υποσαχάριας Αφρικής, όπου επηρεάζει σημαντικά την ποιότητα ζωής και τα ποσοστά θνησιμότητας του πληθυσμού. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη ακριβών, απλών και οικονομικά προσιτών διαγνωστικών εργαλείων για χρήση στα σημεία παροχής φροντίδας (point-of-care), κρίνεται απαραίτητη για την αποτελεσματική διαχείριση της νόσου. Για το λόγο αυτό, πληθώρα διαγνωστικών δοκιμασιών έχουν αναπτυχθεί, οι οποίες βασίζονται στην ανίχνευση της παρουσίας ή των διαφορετικών βιοχημικών ιδιοτήτων της μεταλλαγμένης αιμοσφαιρίνης, σε αντίθεση με τις συμβατικές διαγνωστικές μεθόδους, που απαιτούν τη χρήση πολύπλοκου εξοπλισμού. Ωστόσο, τα διαγνωστικά αυτά τεστ, βασίζονται κυρίως στην ανίχνευση πρωτεϊνών και στερούνται απλότητας και/ή διακριτικής ικανότητας. Κατά συνέπεια, είναι απαραίτητη η ανάπτυξη εναλλακτικών μεθόδων που να πληρούν τα παραπάνω χαρακτηριστικά. Στη παρούσα διπλωματική εργασία, γίνεται αναφορά στην ανάπτυξη ενός διαγνωστικού τεστ για εφαρμογή στα σημεία παροχής φροντίδας, που στοχεύει στη γενετική βάση της ασθένειας και έχει την ικανότητα να ανιχνεύει τη παρουσία της σημειακής μετάλλαξης που προκαλεί τη δρεπανοκυτταρική αναιμία, σε περίπου 1 ώρα και με κόστος 5 € ανά αντίδραση. Η μέθοδος αποτελείται από τα εξής στάδια: (1) κυτταρική λύση δείγματος σάλιου για την απελευθέρωση των νουκλεϊκών οξέων, (2) ενίσχυση του DNA στόχου, με χρήση ισόθερμης αντίδρασης ανασυνδυαστικής πολυμεράσης (Recombinase Polymerase Amplification), ειδική ως προς το αλληλόμορφο β^S και (3) ανίχνευση των προϊόντων της αντίδρασης ενίσχυσης με χρήση ανάλυσης πλευρικής ροής (Lateral Flow Assay). Συνοψίζοντας, με την παρούσα μελέτη, στοχεύουμε να αναδείξουμε την ανάπτυξη μιας γρήγορης, απλής ως προς τη χρήση και οικονομικά προσιτής δοκιμασίας ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος για τη διάγνωση της δρεπανοκυτταρικής αναιμίας, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικό τεστ στα σημεία παροχής φροντίδας.

Φυσική περιγραφή

57 σ. : πίν., σχήμ., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά, Ελληνικά

Θέμα

Lateral Flow Assay

Recombinase Polymerase Amplification

Sickle cell disease

Ανάλυση πλευρικής ροής

Ισόθερμη τεχνική ενίσχυσης

Σημεία παροχής φροντίδας

Ημερομηνία έκδοσης