E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Ταυτοποίηση ενζύμων από ψυχρόφιλα βακτήρια με πιθανές εφαρμογές στη βιοτεχνολογία

Αρχική Ταυτοποίηση ενζύμων από ψυχρόφιλα βακτήρια με πιθανές εφαρμογές στη βιοτεχνολογία

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000403578

Τίτλος

Ταυτοποίηση ενζύμων από ψυχρόφιλα βακτήρια με πιθανές εφαρμογές στη βιοτεχνολογία

Άλλος τίτλος

Identification of enzymes from psychrophilic bacteria with potential applications in biotechnology

Συγγραφέας

Συμεωνίδου, Ανθή Σ.

Σύμβουλος διατριβής

Καφετζόπουλος, Δημήτριος

Περίληψη

Τα κρύα ενδιαιτήματα αποικίζονται από ψυχρόφιλους οργανισμούς που ανέπτυξαν ποικίλους μηχανισμούς προσαρμογής σε χαμηλή θερμοκρασία, ένας από αυτούς εστιάζεται στις τροποποιήσεις των ενζύμων τους. Περαιτέρω έρευνες σε ψυχρόφιλα ένζυμα θα μπορούσαν να οδηγήσουν σε καλύτερη κατανόηση των μηχανισμών προσαρμογής τους σε αυτές τις συνθήκες και να αξιολογήσουν την πιθανή εφαρμογή τους στη βιοτεχνολογία, εξαιτίας της υψηλής δραστικότητας σε χαμηλές θερμοκρασίες και της εύκολης απενεργοποίησης τους με θερμική επώαση . Σε μια συλλογή από ~262 ψυχρόφιλα/ψυχρότροφα βακτηριακά στελέχη από την Ανταρκτική, πραγματοποιήθηκε σάρωση για την ύπαρξη δυο ενζυμικών ενεργοτήτων: νουκλεάσης και αλκαλικής φωσφατάσης. Ακολούθησε γενωμική αλληλούχιση των στελεχών με τα πιο επιθυμητά χαρακτηριστικά και ταυτοποίηση των αλληλουχιών που κωδικοποιούν τα επιλεγμένα ένζυμα. Ένα γονίδιο από το βακτηριακό στέλεχος ΤΑΒ110α, που φέρεται να κωδικοποιεί μια αλκαλική φωσφατάση, παρουσιάζει ~75% και 30% ταυτοποίηση με τις αμινοξικές αλληλουχίες της E.coli (ECAP) και Ανταρκτικής (AnP) αλκαλικής φωσφατάσης, αντίστοιχα. Κλωνοποίηση του γονιδίου σε pRSETB φορέα και ετερόλογη έκφραση σε E.coli στέλεχος έκφρασης, απέδωσε πρωτεΐνη με 70-80%% καθαρότητα. Περαιτέρω πειράματα, σχετικά με την καταλυτική αποδοτικότητα και την θερμική αστάθεια του ενζύμου, θα μπορούσαν να διαλευκάνουν τον δυνητικά ψυχρόφιλο χαρακτήρα του. Χρησιμοποιώντας ένα φυσικό υπόστρωμα, όπως πλασμιδιακό DNA, η αποδοτικότητα της αποφωσφορυλίωσης του θα μπορούσε να μετρηθεί και να συγκριθεί με άλλες εμπορικές αλκαλικές φωσφατάσες προκειμένου να διευκρινιστεί η πιθανή χρήση του σε εφαρμογές μοριακής βιολογίας.

Φυσική περιγραφή

46 φύλλα : σχεδ., πίν., εικ. (μερ. έγχ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Alkaline phosphatase

NGS

Psychrophilic enzyme

Αλκαλική φωσφατάση

Αλληλούχιση νέας γενιάς

Ψυχρόφιλο ένζυμο

Ημερομηνία έκδοσης