| Περίληψη |
Στις μέρες μας ένα μεγάλο ποσοστό ανθρώπων πάσχει από χρόνιες ασθένειες η θεραπεία των οποίων απαιτεί συνεχή χρήση φαρμάκων προκειμένου να ελαττωθεί η αίσθηση του πόνου. Αυτό όμως οδηγεί στην ανάπτυξη ανοχής του οργανισμού με αποτέλεσμα για την επίτευξη του ίδιου αναλγητικού αποτελέσματος να απαιτούνται υψηλότερες δόσεις φαρμάκου που με τη σειρά τους αυξάνουν τον κίνδυνο παρενεργειών και εθισμού. Τα αναλγητικά φάρμακα όπως η μορφίνη, η φαιντανύλη κ.α., ασκούν τις δράσεις τους καθώς προσδένονται στους μ απιοειδείς υποδοχείς (MOR), οι οποίοι συζεύγνονται με τις G πρωτεΐνες. Οι περισσότερες εξαρτησιογόνες ουσίες επιδρούν στο μεσολιμβικό σύστημα ανταμοιβής το οποίο εκτίνεται από VTA (Ventral Tegmental Area) ως τον επικλινή πυρήνα. Οι RGS (Regulators of G protein Signaling) πρωτεΐνες ρυθμίζουν την ένταση και τη δραστικότητα των G πρωτεϊνών μετά την ενεργοποίηση των μ υποδοχέων, δρώντας ως σημαντικοί ρυθμιστές στο σηματοδοτικό μονοπάτι του κυττάρου. Τρία μέλη της οικογένειας των RGS, RGS9-2, RGS4 και RGSz έχει δειχθεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στη δράση των αναλγητικών φαρμάκων. Η spinophilin είναι μια ευρέως εκφραζόμενη δενδριτική πρωτεΐνη που δρα ως σκαλωσιά για πληθώρα άλλων πρωτεϊνών. H spinophilin έχει σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στην μετάδοση της κυτταρικής σηματοδότησης αλλά και της πλαστικότητας των δενδριτικών ακάνθων. Ο ρόλος της spinophilin στην προσαρμοστική διεργασία που χαρακτηρίζει τον εθισμό στα οπιοειδή δεν έχει κατανοηθεί πλήρως. Στην παρούσα μελέτη εξετάστηκε με πειράματα ανοσοκατακρήμνισης οι αλληλεπιδράσεις τις spinophilin με συγκεκριμένες RGS πρωτεΐνες, RGS9-2, RGS4 και RGSz στην περιοχή του ραβδωτού και κατά πόσο η ένταση των συμπλόκων αλλάζει κατόπιν διέγερσης του υποδοχέα με διαφορετικούς αγωνιστές, μορφίνη ή φαιντανύλη. Και οι τρεις RSG πρωτεΐνες αλληλεπιδρούν με την spinophilin στη βασική κατάσταση. Η ανάλυση παροδικά επιμολυσμένων κυττάρων HEK293 με χρήση συνεστιακής μικροσκοπίας αποκάλυψε ότι στη βασική κατάσταση η spinophilin συνεντοπίζεται με τον υποδοχέα MOR. Κατόπιν διέγερσης του MOR με μορφίνη ο υποδοχέας ενδοκυττώνεται σε διαφορετικά κυτταρικά διαμερίσματα από αυτά που ενδοκυττώνεται η spinophilin. Η κυτταρική θέση της spinophilin παρατηρήθηκε και με πειράματα σε πραγματικό χρόνο (live imagine) που έγιναν σε ινοβλάστες διαμολυσμένους με ένα spinophilin-GFP όχημα. Τέλος, για τον έλεγχο του αν η spinophilin παίζει ρόλο στην σωστή τοποθέτηση RGS πρωτεϊνών στο κύτταρο πραγματοποιήθηκαν πειράματα ανοσοϊστοχημείας σε MEF κυτταρικές σειρές που είτε υπήρχε είτε απουσίαζε το γονίδιο της spinophilin. Παρατηρήσαμε ότι απουσία
spinophilin η RGS9-2 δε τοποθετείτε σωστά στην κυτταρική μεμβράνη. Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται σε αυτήν την εργασία οδηγούν στο συμπέρασμα ότι η spinophilin έχει ένα ουσιώδη ρόλο στην ρύθμιση της απόκρισης των υποδοχέων των μ οπιοειδών (MOR) στη δράση των RGS πρωτεϊνών και στις προσαρμοστικές αλλαγές που σχετίζονται με τον εθισμό σε οπιοειδή.
|
Ο ρόλος της πρωτεΐνης spinophilin στη μεταγωγή σήματος στο σχηματισμό σηματοδοτικών συμπλοκών στα βασικά γάγγλια του εγκεφάλου
