Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Συγκριτική αξιολόγηση μεθόδων απομόνωσης κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Τίτλος Συγκριτική αξιολόγηση μεθόδων απομόνωσης κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων
Συγγραφέας Τσεκρέκου, Μαρία
Σύμβουλος διατριβής Παπαματθαιάκης, Ιωσήφ
Περίληψη Κατά την διάρκεια των τελευταίων ετών αυξάνονται συνεχώς τα στοιχεία, τα οποία συνδέουν τα κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα (CTCs) με την εμφάνιση μεταστατικής νόσου, της κύριας αιτίας θανάτου από καρκίνο. Επιπλέον, πολλές μελέτες έχουν καταδείξει την πιθανή προγνωστική και διαγνωστική αξία των CTCs, ιδιαίτερα στον καρκίνο του μαστού. Κατά συνέπεια, ο μοριακός και γενετικός χαρακτηρισμός των CTCs καθίσταται απαραίτητος για την κατανόηση της βιολογίας της μετάστασης αλλά και για την ανάπτυξη ευαίσθητων και αξιόπιστων κλινικών μεθόδων. Βασικός περιορισμός στην ανάλυση των CTCs είναι ο μικρός αριθμός τους στο περιφερικό αίμα των ασθενών. Επί του παρόντος, ανιχνεύονται συνδυάζοντας δύο βήματα: την απομόνωση/εμπλουτισμό και την ανίχνευση. Στην βιβλιογραφία, έχουν περιγραφεί πληθώρα μεθόδων εμπλουτισμού, πολλές από τις οποίες χρησιμοποιούνται χωρίς να έχει πραγματοποιηθεί συστηματική αξιολόγησή τους. Επιπλέον, οι τεχνικές αυτές αξιοποιούν διαφορετικές κυτταρικές ιδιότητες για τον διαχωρισμό των κυττάρων, με αποτέλεσμα να παρουσιάζουν πολύ διαφορετικά αποτελέσματα. Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι η συγκριτική αξιολόγηση πέντε μεθόδων απομόνωσης ως προς την απόδοση, την καθαρότητα και την βιωσιμότητα των ανακτώμενων κυττάρων. Επιλέχθηκαν οι (α) διήθηση, (β) φυγοκέντρηση διαβάθμισης πυκνότητας, (γ) σχηματισμός ανοσοροζεττών (δύο πρωτόκολλα), (δ) θετική επιλογή με μαγνητικά σφαιρίδια και (ε) αρνητική επιλογή με μαγνητικά σφαιρίδια. Οι δύο πρώτες διαχωρίζουν τα κύτταρα με βάση φυσικές ιδιότητες (μέγεθος και πυκνότητα αντιστοίχως), ενώ οι υπόλοιπες αξιοποιούν την έκφραση επιφανειακών δεικτών για την θετική ή την αρνητική επιλογή των κυττάρων στόχων. Η επαναληψιμότητα των πειραμάτων εξασφαλίζεται με την χρήση τεχνητών δειγμάτων, δηλαδή δειγμάτων αίματος υγιών ατόμων, στα οποία προστίθεται καθορισμένος αριθμός σημασμένων με πράσινη φθορίζουσα χρωστική καρκινικών κυττάρων MCF-7 (κυτταρική σειρά καρκίνου τού μαστού). Ιδιαίτερη έμφαση δόθηκε στις συγκεντρώσεις 1000, 100 και 10 MCF-7/mL αίματος. Ακολουθεί ο εμπλουτισμός με μία από τις επιλεγμένες μεθόδους κάθε φορά. Τα προϊόντα εμπλουτισμού υφίστανται δοκιμασία βιωσιμότητας, με αποτέλεσμα τα ζώντα κύτταρα να αποκτούν μπλε φθορισμό. Η απόδοση, ο βαθμός εμπλουτισμού και η βιωσιμότητα των ανακτώμενων κυττάρων αξιολογούνται με κυτταρομετρία ροής και χρήση εσωτερικού δείγματος ελέγχου για τον προσδιορισμό απόλυτων αριθμών κυττάρων. Η διήθηση παρουσίασε μεγάλες διακυμάνσεις λόγω τεχνικών προβλημάτων και κρίνεται ότι χρίζει περαιτέρω διερεύνησης. Από τις υπόλοιπες μεθόδους, η θετική επιλογή με μαγνητικά σφαιρίδια παρουσίασε την υψηλότερη καθαρότητα και μέτρια απόδοση, ενώ η αρνητική επιλογή την υψηλότερη απόδοση και χαμηλή καθαρότητα.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα
CTCs
Μέθοδοι ανίχνευσης
Ημερομηνία έκδοσης 2012-11-16
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Πτυχιακές εργασίες
  Τύπος Εργασίας--Πτυχιακές εργασίες
Εμφανίσεις 69

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 24