Περίληψη |
Τα
Ras
πρωτο-‐ογκογονίδια
(H-‐Ras,
Κ-‐Ras
και
Ν-‐Ras)
είναι
μέρος
των
ενδοκυτταρικών
σηματοδοτικών
μονοπατιών
που
παίζουν
σημαντικό
ρόλο
στην
κυτταρική
ανάπτυξη,
τη
ρύθμιση
και
τον
κακοήθη
μετασχηματισμό.
Σε
αυτή
τη
μελέτη
ερευνήθηκε
η
παρουσία
μεταλλάξεων
στο
κωδικόνιο
12
των
Η-‐,
Κ-‐
και
Ν-‐Ras
ογκογονιδίων
σε
μια
σειρά
από
32
καλοηθών
και
κακοηθών
όγκων
του
θυρεοειδούς,
συνδυαζόμενα
με
φυσιολογικό
γειτονικό
ιστό,
με
τη
χρήση
της
αλυσιδωτής
αντίδρασης
της
πολυμεράσης
PCR
και
της
ανάλυσης
πολυμορφισμού
μεγέθους
περιοριστικών
θραυσμάτων
RFLP.
Επιπροσθέτως,
μετρήσαμε
τα
επίπεδα
έκφρασης
των
τριών
γονιδίων
Ras
χρησιμοποιώντας
ποσοτική
αλυσιδωτή
αντίδραση
της
πολυμεράσης
(qPCR)
με
SYBR
Green
Ι
®
χημεία.
Η
β-‐ακτίνη
χρησιμοποιήθηκε
ως
γονίδιο
ελέγχου.
Δεν
ανιχνεύθηκαν
H-‐Ras
μεταλλάξεις
στη
σειρά
των
δειγμάτων
του
θυρεοειδούς.
Επιπροσθέτως,
το
Ν-‐Ras
μεταλλάχθηκε
σε
μόνο
1/32
(3,1%)
κακοήθη
δείγμα.
Αντιθέτως,
Κ-‐Ras
μεταλλάξεις
ανιχνεύθηκαν
σε
10/32
(40,6%)
δείγματα
όγκων.
Η
ανάλυση
της
έκφρασης
έδειξε
ότι
η
K-‐Ras
ήταν
απορυθμισμένη
στο
50%
των
όγκων
του
θυρεοειδούς,
που
παρουσιάζει
υπερέκφραση
σε
9/32
(28,1%)
και
υποέκφραση
σε
7/32
(21,9%)
δείγματα,
αντίστοιχα.
Ένα
παρόμοιο
μοτίβο
παρατηρήθηκε
για
τα
επίπεδα
έκφρασης
του
γονιδίου
Ν-‐Ras,
αφού
σε
9/32
(28,1%)
δείγματα
τα
επίπεδα
του
mRNA
ήταν
αυξημένα
και
σε
10/32
(31,3%)
τα
επίπεδα
της
έκφρασης
ήταν
μειωμένα.
Ενδιαφέρον
είναι,
ότι
σε
11/32
(34,4%)
ζεύγη
δειγμάτων
το
γονίδιο
Ν-‐Ras
δεν
εκφράζεται
ούτε
στην
νεοπλαστική
ούτε
στο
δείγμα
φυσιολογικού.
Αντιθέτως,
τα
mRNA
επίπεδα
του
γονιδίου
H-‐Ras
υποεκφράζεται
σε
12/32
(37,5%)
και
βρέθηκαν
αυξημένα
σε
5/32
(15,6%)
δείγματα,
αντίστοιχα.
Από
τα
παραπάνω
αποτελέσματα
συμπεραίνουμε
ότι
μόνο
Κ-‐Ras
μεταλλάξεις
είναι
ένα
συχνό
συμβάν
σε
κακοήθειες
του
θυρεοειδούς
και
ότι
και
οι
τρεις
ογκογονίδια
Ras
αποκλίνουν
από
το
φυσιολογικό
πρότυπο
έκφρασης,
υποδηλώνοντας
ένα
σημαντικό
ρόλο
για
αυτή
την
οικογένεια
γονιδίων
στην
ογκογένεση
του
θυρεοειδούς.
Το
γονίδιο
Β-‐Raf,
είναι
μέλος
της
οικογένειας
Raf
κινασών
σερίνης
/
θρεονίνης,
είναι
ένα
ενδιάμεσο
μόριο
στην
μιτογόνο-‐ενεργοποιημένη
πρωτεΐνη
(ΜΑΡ)
κινάσης
του
μονοπατιού,
που
επάγει
εξωκυτταρικά
σήματα
από
την
κυτταρική
μεμβράνη
προς
τον
πυρήνα
μέσω
ενός
καταρράκτη
γεγονότων
φωσφορυλίωσης,
με
στόχο
την
προώθηση
της
ανάπτυξης
του
καρκίνου.
Αυτή
η
οδός
συνήθως
ενεργοποιείται
σε
ανθρώπινες
νεοπλασιές.
Ο
σκοπός
αυτής
της
μελέτης
ήταν
να
διερευνηθεί
ο
ρόλος
του
Β-‐Raf
στην
παθολογία
του
θυρεοειδή.
Ελέγξαμε
για
την
παρουσία
των
μεταλλάξεων
στο
κωδικόνιο
600
(VE)
του
B-‐Raf,
χρησιμοποιώντας
την
αλυσιδωτή
αντίδραση
της
πολυμεράσης
PCR
και
την
ανάλυση
πολυμορφισμού
μεγέθους
περιοριστικών
θραυσμάτων
RFLP.
Σε
III
όγκους
χωρίς
μετάλλαξη
(32
καλοήθεις
και
κακοήθεις
όγκοι
του
θυρεοειδούς)
και
σε
γειτονικό
φυσιολογικό
ιστό
τους,
μετρήθηκαν
τα
επίπεδα
έκφρασης
του
Β-‐Raf
γονιδίου,
χρησιμοποιώντας
ποσοτική
PCR
πραγματικού
χρόνου
(qPCR).
Η
Β-‐Raf
V600E
έκφραση
σε-‐αρνητικούς
όγκους
παρέκκλινε
από
το
φυσιολογικό
πρότυπο,
δεδομένου
ότι
υπερεκφράζεται
στο
42%
των
καλοήθων
δειγμάτων
και
υποεκφράζεται
στο
54%
των
κακοήθων
δειγμάτων.
Η
θυρεοειδίτιδα
Hashimoto
επίσης
φάνηκε
να
παίζει
ένα
σημαντικό
ρόλο,
δεδομένου
ότι
τα
καλοήθη
δείγματα
με
θυρεοειδίτιδα
Hashimoto
είχαν
2,2
φορές
υψηλότερη
Β-‐Raf
έκφρασης
από
τα
δείγματα
χωρίς
θυρεοειδίτιδα
(1,71
±
0,63
έναντι
0,78
±
0,13).
Η
στατιστική
ανάλυση
αποκάλυψε
ότι
η
Β-‐Raf
απορρύθμιση
αναβάλλει
την
εκδήλωση
της
νόσου
κατά
περισσότερο
από
10
χρόνια
σε
καλοήθεις
και
κακοήθεις
όγκους
του
θυρεοειδούς.
(καλοήθης:
55,6
±
3,9
έναντι
45,3
±
3,3,
p
=
0,049?
κακοήθεις:
52,2
±
3,5
έναντι
33,0
±
7,9,
p
=
0,020).
Από
τα
παραπάνω
αποτελέσματα
συμπεραίνουμε
ότι
στην
απουσία
της
ενεργοποίησης
της
μετάλλαξης,
Β-‐Raf
υπερέκφραση
ή
υποέκφραση
είναι
ένα
προστατευτικό
γεγονός,
δεδομένου
ότι
καθυστερεί
την
ανάπτυξη
τόσο
των
κακοήθων
και
καλοήθων
όγκων
του
θυρεοειδούς.
|