E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Μελέτη της έκφρασης των ογκογονιδίων RAS σε σχέση με τα γονίδια RAF σε καλοήθης όγκους του θυρεοειδή αδένα

Αρχική Μελέτη της έκφρασης των ογκογονιδίων RAS σε σχέση με τα γονίδια RAF σε καλοήθης όγκους του θυρεοειδή αδένα

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000378406

Τίτλος

Μελέτη της έκφρασης των ογκογονιδίων RAS σε σχέση με τα γονίδια RAF σε καλοήθης όγκους του θυρεοειδή αδένα

Άλλος τίτλος

Expression analysis of the RAS family oncogene relative to the RAF gene in benign and malignant tumors of the thyroid gland

Συγγραφέας

Δέρβας, Σταύρος Π

Σύμβουλος διατριβής

Σπαντίδος, Δημήτριος

Μέλος κριτικής επιτροπής

Ζώρας

Μέλος κριτικής επιτροπής

Σουρβίνος

Περίληψη

Τα Ras πρωτο-‐ογκογονίδια (H-‐Ras, Κ-‐Ras και Ν-‐Ras) είναι μέρος των ενδοκυτταρικών σηματοδοτικών μονοπατιών που παίζουν σημαντικό ρόλο στην κυτταρική ανάπτυξη, τη ρύθμιση και τον κακοήθη μετασχηματισμό. Σε αυτή τη μελέτη ερευνήθηκε η παρουσία μεταλλάξεων στο κωδικόνιο 12 των Η-‐, Κ-‐ και Ν-‐Ras ογκογονιδίων σε μια σειρά από 32 καλοηθών και κακοηθών όγκων του θυρεοειδούς, συνδυαζόμενα με φυσιολογικό γειτονικό ιστό, με τη χρήση της αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης PCR και της ανάλυσης πολυμορφισμού μεγέθους περιοριστικών θραυσμάτων RFLP. Επιπροσθέτως, μετρήσαμε τα επίπεδα έκφρασης των τριών γονιδίων Ras χρησιμοποιώντας ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης (qPCR) με SYBR Green Ι ® χημεία. Η β-‐ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο ελέγχου. Δεν ανιχνεύθηκαν H-‐Ras μεταλλάξεις στη σειρά των δειγμάτων του θυρεοειδούς. Επιπροσθέτως, το Ν-‐Ras μεταλλάχθηκε σε μόνο 1/32 (3,1%) κακοήθη δείγμα. Αντιθέτως, Κ-‐Ras μεταλλάξεις ανιχνεύθηκαν σε 10/32 (40,6%) δείγματα όγκων. Η ανάλυση της έκφρασης έδειξε ότι η K-‐Ras ήταν απορυθμισμένη στο 50% των όγκων του θυρεοειδούς, που παρουσιάζει υπερέκφραση σε 9/32 (28,1%) και υποέκφραση σε 7/32 (21,9%) δείγματα, αντίστοιχα. Ένα παρόμοιο μοτίβο παρατηρήθηκε για τα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου Ν-‐Ras, αφού σε 9/32 (28,1%) δείγματα τα επίπεδα του mRNA ήταν αυξημένα και σε 10/32 (31,3%) τα επίπεδα της έκφρασης ήταν μειωμένα. Ενδιαφέρον είναι, ότι σε 11/32 (34,4%) ζεύγη δειγμάτων το γονίδιο Ν-‐Ras δεν εκφράζεται ούτε στην νεοπλαστική ούτε στο δείγμα φυσιολογικού. Αντιθέτως, τα mRNA επίπεδα του γονιδίου H-‐Ras υποεκφράζεται σε 12/32 (37,5%) και βρέθηκαν αυξημένα σε 5/32 (15,6%) δείγματα, αντίστοιχα. Από τα παραπάνω αποτελέσματα συμπεραίνουμε ότι μόνο Κ-‐Ras μεταλλάξεις είναι ένα συχνό συμβάν σε κακοήθειες του θυρεοειδούς και ότι και οι τρεις ογκογονίδια Ras αποκλίνουν από το φυσιολογικό πρότυπο έκφρασης, υποδηλώνοντας ένα σημαντικό ρόλο για αυτή την οικογένεια γονιδίων στην ογκογένεση του θυρεοειδούς. Το γονίδιο Β-‐Raf, είναι μέλος της οικογένειας Raf κινασών σερίνης / θρεονίνης, είναι ένα ενδιάμεσο μόριο στην μιτογόνο-‐ενεργοποιημένη πρωτεΐνη (ΜΑΡ) κινάσης του μονοπατιού, που επάγει εξωκυτταρικά σήματα από την κυτταρική μεμβράνη προς τον πυρήνα μέσω ενός καταρράκτη γεγονότων φωσφορυλίωσης, με στόχο την προώθηση της ανάπτυξης του καρκίνου. Αυτή η οδός συνήθως ενεργοποιείται σε ανθρώπινες νεοπλασιές. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί ο ρόλος του Β-‐Raf στην παθολογία του θυρεοειδή. Ελέγξαμε για την παρουσία των μεταλλάξεων στο κωδικόνιο 600 (VE) του B-‐Raf, χρησιμοποιώντας την αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης PCR και την ανάλυση πολυμορφισμού μεγέθους περιοριστικών θραυσμάτων RFLP. Σε III όγκους χωρίς μετάλλαξη (32 καλοήθεις και κακοήθεις όγκοι του θυρεοειδούς) και σε γειτονικό φυσιολογικό ιστό τους, μετρήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης του Β-‐Raf γονιδίου, χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qPCR). Η Β-‐Raf V600E έκφραση σε-‐αρνητικούς όγκους παρέκκλινε από το φυσιολογικό πρότυπο, δεδομένου ότι υπερεκφράζεται στο 42% των καλοήθων δειγμάτων και υποεκφράζεται στο 54% των κακοήθων δειγμάτων. Η θυρεοειδίτιδα Hashimoto επίσης φάνηκε να παίζει ένα σημαντικό ρόλο, δεδομένου ότι τα καλοήθη δείγματα με θυρεοειδίτιδα Hashimoto είχαν 2,2 φορές υψηλότερη Β-‐Raf έκφρασης από τα δείγματα χωρίς θυρεοειδίτιδα (1,71 ± 0,63 έναντι 0,78 ± 0,13). Η στατιστική ανάλυση αποκάλυψε ότι η Β-‐Raf απορρύθμιση αναβάλλει την εκδήλωση της νόσου κατά περισσότερο από 10 χρόνια σε καλοήθεις και κακοήθεις όγκους του θυρεοειδούς. (καλοήθης: 55,6 ± 3,9 έναντι 45,3 ± 3,3, p = 0,049? κακοήθεις: 52,2 ± 3,5 έναντι 33,0 ± 7,9, p = 0,020). Από τα παραπάνω αποτελέσματα συμπεραίνουμε ότι στην απουσία της ενεργοποίησης της μετάλλαξης, Β-‐Raf υπερέκφραση ή υποέκφραση είναι ένα προστατευτικό γεγονός, δεδομένου ότι καθυστερεί την ανάπτυξη τόσο των κακοήθων και καλοήθων όγκων του θυρεοειδούς.

Φυσική περιγραφή

88 σ : πιν. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Expression

Oncogenes RAS

RAF Genes

Thyroid gland

Έκφραση

Γονίδιο RAF

Ογκογονίδια RAS