| Περίληψη |
Ο ERF (ETS-2 Repressor factor) αποτελεί παράγοντα της ETS οικογένειας
μεταγραφικών παραγόντων με ισχυρή κατασταλτική δράση. Φωσφορυλιώνεται από την
ενεργή ERK (pERK) μεσω δυο FxF μοτίβων που διατηρεί στο κεντρικό κομμάτι του. Η
λειτουργία του είναι άμεσα εξαρτώμενη από την τοπολογία του στο κύτταρο. Σε
πρωτογενής ινοβλάστες ποντικού η αποφωσφορυλιωμένη μορφή του ERF είναι
αποκλειστικά πυρηνική ενώ όταν φωσφορυλιώνεται από την ERK μετατοπίζεται στο
κυτταρόπλασμα όπου και παύει να καταστέλλει. Ένα πιθανό γονίδιο στόχος του ERF
φαίνεται να είναι το Olig1 γονίδιο. Το Olig1 γονίδιο σχετίζεται με την διαφοροποίηση
των ολιγοδενδροκυττάρων και εμπλέκεται στους μηχανισμούς μυελινοποιήσης των
αξόνων στους νευρώνες. Επίσης υπερεκφράζεται σε όλους τους καρκίνους της γλοίας.
Πειράματα μικροσυστοιχιών έδειξαν ότι το Olig1 γονίδιο υπερεκφράζεται στους
ελλειμματικούς ως προς τον ERF ινοβλάστες κατά την 9,5 ημέρα εμβρυικής ανάπτυξης.
Πειράματα ανοσοκατακρήμνισης χρωματίνης σε πρωτογενής ινοβλαστες ποντικού
(MEFs) έχουν δείξει ότι ο ERF σε συνθήκη έλλειψης ορού προσδένεται με μεγαλύτερη
συνάφεια στον Olig1 υποκινητή. Το ίδιο συμβαίνει και σε ποντικίσιους ινοβλάστες από
κεφάλια εμβρύων ποντικών ημέρας 13,5 οπου φάνηκε ότι σε συνθήκη έλλειψης ορού για
4 ώρες ο ERF προσδένεται με υψηλότερη συνάφεια κατά 1,8 φορές συγκριτικά με την
κανονική συνθήκη, παράλληλα τα mRNA επίπεδα του Olig1 δεν φάνηκαν να
επηρεάζονται αισθητά. Η έκφραση του Olig1 γονιδίου παρουσίασε διαφορά μεταξύ
ποντικίσιων ινοβλαστών από έμβρυα ποντικού 10,5 και 13,5 ημέρας εμβρυϊκής
ανάπτυξης, κατά την πρόοδο της ανάπτυξής τους σε in vitro καλλιέργεια. Στους
πρωτογενής ινοβλάστες από κεφάλια εμβρύου ποντικού 13,5 ημέρας εμβρυϊκής
ανάπτυξης φάνηκε ότι κατά το πρώτο πέρασμα των κυττάρων σε καλλιέργεια η έκφραση
του Olig1 μειώθηκε σε συνθήκη έλλειψης ορού για 4 ώρες συγκριτικά με την κανονική
συνθήκη. Αντιθέτως στα ίδια κύτταρα κατά το τρίτο πέρασμα τους η έκφραση του Olig1
σε συνθήκη έλλειψης ορού για 4 ώρες οριακά αυξήθηκε συγκριτικά με την κανονική
συνθήκη. Στα MEFs κατά την 10,5 ημέρα εμβρυϊκής ανάπτυξης φαίνεται να συμβαίνει
το ακριβώς αντίθετο συγκριτικά με αυτά της 13,5 ημέρας. Κατά το πρώτο πέρασμά τους
σε συνθήκη έλλειψης ορού για 4 ώρες η έκφραση του Olig1 είναι υψηλότερη συγκριτικά
με αυτή της κανονικής συνθήκης ενώ κατά το τρίτο πέρασμα μικρότερη. Πειράματα
διαμολύνσεων σε REF1 κύτταρα έδείξαν ότι ο ERF καταστέλλει το γονίδιο αναφοράς
στο οποίο έχει κλωνοποιηθεί ο Olig1 υποκινητής. Ο μεταλλαγμένος ERF σε όλα τα
σημεία φωσφορυλίωσης και αποκλειστικά πυρηνικός καταστέλλει σε πολύ μεγαλύτερο
βαθμό. Επι παρουσία τριχοστατίνης η κατατολή διατηρείται αλλα σε μικρότερο βαθμό.
Πειράματα διαμόλυνσης ίδιου τύπου σε 3 διαφορετικά τμήματα του Olig1 υποκινητή
έδειξαν πως μια πολύ υψηλά συντηρημένη περιοχή με τον άνθρωπο μήκους 245 βάσεων
ανοδικά του σημείου έναρξης της μεταγραφής παρουσιάζει την ίδια ακριβώς ενεργότητα
συγκριτικά με ολόκληρο τον υποκινητή. Ταυτόχρονα σε όλα τα τμήματα του υποκινητή
που κλωνοποιήθηκαν η καταστολή του ERF και Μ1-7 παρουσιάστηκε στην ίδια
αναλογία. Μεταλλαγή της μοναδικής ETS αλληλουχίας που υπάρχει εντός της
συντηρημένης με τον άνθρωπο περιοχής διατήρησε την ίδια ακριβώς καταστολή
συγκριτικά με τον αγρίου τύπου υποκινητή. Η μεταλλαγή αυτή ανεξάρτητα από το ότι
δεν επηρέασε καθόλου την καταστολή από τον ERF, ελάττωσε την ενεργότητα του
υποκινητή κατά 30-50% περίπου.
|
Μελέτη της έκφρασης του Olig1 γονιδίου. Χαρτογράφηση του Olig1 υποκινητή και μελέτη της κατασταλτικής δράσης του ERF στο Olig1 γονίδιο
