| Περίληψη |
Ένας από τους πιο γνωστούς τρόπους επικοινωνίας των οστεοβλαστικών κυττάρων είναι διαμέσου των χασμοσυνδέσμων της κυτταρικής τους μεμβράνης. Οι οστεοβλάστες διαθέτουν χασμοσυνδέσμους από κοννεξίνη43 (Cx43) και κοννεξίνη45 (Cx45). Η ικανότητα των κυττάρων να επικοινωνούν μεταξύ τους εκτιμάται, πειραματικά, με τη μέθοδο της χρωστικής σύζευξης (ΧΣ) (την ικανότητα, δηλαδή, των κυττάρων να διαχέουν φθορίζουσες χρωστικές ουσίες στα γειτονικά τους κύτταρα). Σκοπός της παρούσης έρευνας είναι η μελέτη (α) της επίδρασης που έχει η μηχανική διέγερση (διάταση) ή η παρουσία διαφόρων χυμικών παραγόντων στην επικοινωνία των οστεοβλαστικών κυττάρων ROS 17/2.8 και UMR 106-01 διαμέσου των χασμοσυνδέσμων τους και (β) η μεταβολή στη μεταγραφική δραστηριότητα θεμελιωδών γονιδίων των κυττάρων αυτών ανάλογα με τον τύπο χασμοσυνδέσμου που εκφράζουν. Η διάταση των κυττάρων έγινε με τη συσκευή Flexercell Strain Unit και η ΧΣ μετρήθηκε με τη νέα μέθοδο Parachute Assay. Οι χυμικοί παράγοντες που χρησιμοποιήθηκαν ήσαν η παραθορμόνη και η προσταγλανδίνη E2. Βρήκαμε ότι τόσο ο μηχανικός όσο και ο χυμικός παράγοντας προκαλούν αύξηση της ΧΣ και κατ επέκταση της επικοινωνίας των οστεοβλαστικών κυττάρων διαμέσου των χασμοσυνδέσμων τους. Ο μηχανισμός είναι κοινός για τους δυο παράγοντες, τουλάχιστον στα αρχικά στάδια της διέγερσης. Η αύξηση είναι ανεξάρτητη από τη μεταγραφή του γονιδίου της Cx43 και οφείλεται στην ανακατανομή της προσχηματισμένης πρωτεΐνης Cx43 από το κυτταρόπλασμα στην κυτταρική μεμβράνη και τη συνάθροισή της στη μορφή λειτουργικών χασμοσυνδέσμων. Στην περίπτωση του χυμικού παράγοντα η αρχική φάση ακολουθείται από διέγερση της μεταγραφής του γονιδίου της Cx43 και πρωτεϊνοσύνθεση. Τέλος, βρήκαμε ότι η επιμόλυνση των κυττάρων ROS (που φυσιολογικά εκφράζουν Cx43) με το γονίδιο της Cx45 μείωσε όχι μόνο την ικανότητα τους για χρωστική αλλά και τη μεταγραφική δραστηριότητα των γονιδίων της οστεοκαλσίνης και οστικής σιαλοπρωτείνης (ανάλυση Northern Blot, μέθοδος λουσιφεράσης). Αντίθετα αποτελέσματα βρήκαμε με επιμόλυνση των UMR 106.01, που φυσιολογικά εκφράζουν κυρίως Cx45, με το γονίδιο της Cx43
|
Διακυτταρική επικοινωνία στη φυσιολογία των οστικών κυττάρων
