| Περίληψη |
Στην παρούσα εργασία έγινε προσπάθεια να απομονωθεί και να ταυτοποιηθεί η πρωτεΐνη «Χαρυβδίνη» από το βολβό του φυτού Charybdis maritima.Πρόκειται για μια πρωτεΐνη με μοριακό βάρος περίπου 29kDa, η οποία ανήκει στην ευρύτερη ομάδα των πρωτεϊνών RIP που αναστέλλουν μη αντιστρεπτά τη δράση των ριβοσωμάτων. Η «Χαρυβδίνη» παρότι ανήκει στην ομάδα των πρωτεϊνών RIP, διαφέρει από τις υπόλοιπες πρωτεΐνες της ομάδας αυτής καθώς στο ενεργό της κέντρο έχει στη θέση 79 μια βαλίνη αντίθετα από τις υπόλοιπες RIP που έχουν τυροσίνη στη θέση αυτή, ενώ τα υπόλοιπα τρία αμινοξέα του ενεργού κέντρου είναι τα ίδια με όλες τις RIP πρωτεΐνες. Η απομόνωση της εν λόγω πρωτεΐνης έγινε στην παρούσα εργασία με δύο διαφορετικούς τεχνικές, η πρώτη τεχνική περιλάμβανε την απομόνωση της πρωτεΐνης «Χαρυβδίνης» με τη χρήση θεϊικού αμμωνίου προκειμένου να καταβυθιστεί έπειτα από διαδοχικές φυγοκεντρήσεις, ενώ η δεύτερη, οδηγούσε στην απομόνωσή της «Χαρυβδίνης» έπειτα από το διαχωρισμό των συστατικών του αλέσματος του βολβού του φυτού Charybdis maritima, από δύο διαφορετικές χρωματογραφικές κολώνες, μια υδροφοβικής χρωματογραφίας (phenyl sepharose) και μια χρωματογραφίας ανιονανταλλαγής(Q-sepharose). Τα δείγματα από την πειραματική μέθοδο με τις διαδοχικές φυγοκεντρήσεις ταυτοποιήθηκε με φασματομετρία μάζας (MALDI-TOF/TOF), ενώ η ταυτοποίηση των δειγμάτων από την πειραματική διεργασία με τις χρωματογραφικές κολώνες βρίσκεται ακόμα σε εξέλιξη. Τα αποτελέσματα έδειξαν πως η πρωτεΐνη που απομονώθηκε και ταυτοποιήθηκε είναι όντως η «Χαρυβδίνη».
|
Απομόνωση και ταυτοίηση της πρωτεΐνης «Χαρυβδίνης» από τον οργανισμό Charybdis maritima agg.
