| Περίληψη |
Το μονοπάτι επιδιόρθωσης DNA μέσω εκτομής νουκλεοτιδίων (Nucleotide Excision Repair pathway, NER) είναι ένα εξελικτικά συντηρημένο μονοπάτι το οποίο διαφυλάσσει το γονιδίωμα και διασφαλίζει την πιστή μεταβίβασή του στο θυγατρικό κύτταρο. Παρ' όλα αυτά, υπάρχει πληθώρα πρωτεϊνών που ενώ συμμετέχουν στο NER, διαθέτουν διακριτούς ρόλους και πέρα από την επιδιόρθωση του DNA, ρόλοι οι οποίοι μπορεί να συσχετίσουν άμεσα βλάβες στο NER με το ρόλο του μονοπατιού αυτού στην ανάπτυξη και την παθογένεια ασθενειών. Μία τέτοια πρωτεΐνη είναι η ΧΑΒ2 η οποία εμπλέκεται στη μεταγραφή, δύο μονοπάτια επιδιόρθωσης DNA, το εξαρτώμενο από τη μεταγραφή NER (Transcription Coupled-NER, TC-NER) και αυτό του ομόλογου ανασυνδυασμού (Homologous Recombination, HR) καθώς και στο μάτισμα του προ-mRNA. Η διάσπαση του γονιδίου της ΧΑΒ2 οδηγεί σε προ-εμφυτική θνησιμότητα αλλά ο ρόλος της παραμένει ακόμα αδιευκρίνιστος. Για αυτό χρησιμοποιήσαμε μεθόδους παρεμβολής RNA (small interfering RNA, siRNA) ώστε να μελετήσουμε το ρόλο της και καταφέραμε να σιγήσουμε επιτυχώς την ΧΑΒ2 στα JM8A3.N1, bioXAB2;birA εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα ποντικού (Mouse Embryonic Stem Cells, mESCs) και στους εμβρυϊκούς ινοβλάστες ποντικού (Mouse Embryonic Fibroblasts, MEFs) τόσο στα επίπεδα RNA όσο και στα πρωτεϊνικά της επίπεδα. Η μελέτη της σίγησης της XAB2 στη μεταγραφή, έδειξε μείωση των υβριδίων RNA-DNA στους πυρηνίσκους των JM8A3.N1 εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων ποντικού καθώς και στους εμβρυϊκούς ινοβλάστες ποντικού ενώ υπήρχε και μία ταυτόχρονη μείωση των επιπέδων της RNA πολυμεράσης ΙΙ. Και οι δύο φαινότυποι διασώθηκαν όταν πραγματοποιήθηκε υπερέκφραση της ΧΑΒ2 στα MEFs. Πειράματα τα οποία διεξάχθηκαν για να αποδειχθεί η συμμετοχή της ΧΑΒ2 στο ΝΕR, έδειξαν ότι δεν αλληλεπιδρά με πρωτεΐνες που είχε αποδειχθεί σε προηγούμενες ερευνητικές δημοσιεύσεις όπως η RNA πολυμεράση ΙΙ και η XPA και περαιτέρω, η σίγησή της δεν προκαλεί γενετική βλάβη όπως προτείνεται μέσω ανοσοφθορισμού όπου χρησιμοποιήθηκε το αντίσωμα ενάντια στη γΗ2Αx. Δεδομένα αλληλούχισης RNA που προέκυψαν από siRNA δείγματα της XAB2 παρουσιάζουν υποεκφραζόμενα γονίδια τα οποία είναι στοχευμένα στη ριβοσωμική ομάδα γονιδίων. Κατά αυτόν τον τρόπο, αυτά τα αποτελέσματα προτάσσουν ένα πιθανό ρόλο της ΧΑΒ2 στη μεταγραφή και το μάτισμα ριβοσωμικών γονιδίων.
|
The functional role of XAB2 in Embryonic Stem Cells
