Περίληψη |
Η SecA είναι μια RNA ελικάση που προσφέρει την απαραίτητη ενέργεια στο Sec σύστημα μεταφοράς προπρωτεϊνών διαμέσου της κυτταροπλασματικής μεμβράνης. Δομικά αποτελείται από τον κινητήρα DEAD, που είναι χαρακτηριστικός για όλες τις ελικάσες και από δύο περιοχές λειτουργικής εξειδίκευσης, την περιοχή πρόσδεσης προπρωτεΐνης (PBD) και την καρβοξυτελική περιοχή (C-domain). Ο κινητήρας DEAD αποτελείται από την περιοχή δέσμευσης νουκλεοτιδίου (NBD) και από την IRA2 περιοχή. Ανάμεσά τους δεσμεύεται το νουκλεοτίδιο. Το PBD αποτελείται από δύο αντιπαράλληλους β κλώνους (Stem) που φύονται μέσα από το NBD και από μια σφαιρική περιοχή, τον βολβό . To Stem βρίσκεται απέναντι από την α8 έλικα του NBD και η αλληλεπίδρασή τους είναι η μοναδική, όπου o DEAD κινητήρας είναι σε φυσική επαφή με το PBD.
Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η μελέτη της σημασίας της α8 έλικας για την SecA καθώς και της αλληλεπίδρασής της με το Stem κατά τη διάρκεια της μετατόπισης των προπρωτεϊνών. Για το σκοπό αυτό δημιουργήθηκαν εφτά μεταλλάγματα της έλικας α8. Από την παρατήρηση ότι 5 από τα 7 μεταλλαγμένα παράγωγα δεν ήταν λειτουργικά όπως η SecA, οδηγηθήκαμε στο συμπέρασμα ότι η α8 έλικα είναι σημαντική για τη SecA. Μελετώντας αναλυτικότερα τις βιοχημικές ιδιότητες των μεταλλαγμάτων βρέθηκε ότι ένα από αυτά, που αναμένεται να χαλαρώνει την αλληλεπίδραση της α8 έλικας με το Stem, είχε διαφορετικό πρότυπο δραστικότητα ATPάσης από τη SecA και η αναλυτική του μελέτη έδειξε ότι απουσία προπρωτεΐνης, προσομοίαζε τη δραστικότητα ATPάσης της αγρίου τύπου SecA κατά τη διάρκεια μετατόπισης προπρωτεϊνών. Οι παραπάνω παρατηρήσεις μας οδήγησαν στο συμπέρασμα ότι η αλληλεπίδραση της έλικας α8 με το Stem είναι σημαντική για τη μετατόπισης των προπρωτεϊνών από τη SecA.
|