E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Development of CRISPR/Cas9-based technologies for genome editing in pancrustacan model organisms

Αρχική Development of CRISPR/Cas9-based technologies for genome editing in pancrustacan model organisms

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000454372

Τίτλος

Development of CRISPR/Cas9-based technologies for genome editing in pancrustacan model organisms

Άλλος τίτλος

Ανάπτυξη τεχνολογιών CRISPR/Cas9 για τη γονιδιωματική τροποποίηση πανκαρκινοειδών μοντέλων οργανισμών

Συγγραφέας

Αρχοντίδης, Θεμιστοκλής Χ.

Σύμβουλος διατριβής

Παυλόπουλος, Αναστάσιος

Μέλος κριτικής επιτροπής

Βόντας, Ιωάννης
Δελιδάκης, Χρήστος

Περίληψη

Το σύστημα γονιδιωματικής τροποποίησηςCRISPR/Cas9 αποτελεί μια επαναστατική τεχνολογία που προσφέρει έναν απλό και ακριβή τρόπο για λειτουργικές γενετικές μελέτες σε διάφορα ερευνητικά πεδία της βιολογίας. Η τεχνολογία αυτή είναι ιδιαίτερα σημαντική για μελέτες σε αναδυόμενους οργανισμούς-μοντέλα με περιορισμένα πειραματικά εργαλεία που έχουν να ωφεληθούν πολύ από νέες μεθοδολογίες για την αδρανοποίηση (knockout) και εισαγωγή αλληλουχιών (knock in) σε γονίδια στόχους. Σκοπός της συγκεκριμένης εργασίας ήταν η ανάπτυξη και βελτιστοποίηση διαφορετικών CRISPR/Cas9 knock in τεχνικών σε δύο αναδυόμενα μοντέλα πανκαρκινοειδών: το κολεόπτερο έντομο Tribolium castaneumκαι το αμφίποδο καρκινοειδές Parhyale hawaiensis. Στην περίπτωση του Tribolium castaneum, εφαρμόστηκε η τεχνικήCRISPR knock inμε τη χρήση μικρών μονόκλωνων μορίων DNA (ssODNs) για την εισαγωγή συγκεκριμένων μη συνώνυμων μεταλλάξεων σε δύο γονίδια, τα dld και Cyt- b5-fad, που έχουν εμπλακεί στην ανθεκτικότητα των εντόμων στη φωσφίνη. Στην περίπτωση του Parhyale hawaiensis,επιλέχτηκε μία στρατηγική CRISPR/Cas9 knock in που βασίζεται σε μη ομόλογο μηχανισμό επιδιόρθωσης (non-homologous end joining)για να ελεγχθεί in vivo το δυαδικό σύστημα γονιδιακής έκφρασης UAS/Gal4.Παρουσιάζονται ποσοτικές και ποιοτικές παράμετροι αυτών των προσεγγίσεων και συζητιούνται για μελλοντικούς πειραματισμούς στα δύο αυτά μοντέλα πανκαρκινοειδών.

Φυσική περιγραφή

58 σ. : πίν., σχήμ., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Binary expression system

CRISPR/Cas9 gene editing

Parhyale hawaiensis

Phosphine

Tribolium casteneum

Δυαδικά συστήματα έκφρασης

Πανκαρκινοειδή