| Περίληψη |
Λόγω του εκτεταμένου επιστημονικού ενδιαφέροντος για την οικογένεια των TNF υποδοχέων, έχει δοθεί αρκετή σημασία στην περιγραφή των σηματοδοτικών μονοπατιών που συμμετέχουν τα μέλη αυτής της οικογένειας. Αυτό οδήγησε στην ανακάλυψη μιας νέας οικογένειας σηματοδοτικών μορίων που ονομάστηκαν TNF-Receptor-Associated Factors (TRAFs). Οι πρωτεΐνες TRAF λειτουργούν ως προσαρμογείς για μια ποικιλία μεμβρανικών υποδοχέων και μπορούν να ρυθμίσουν τόσο θετικά όσο και αρνητικά μονοπάτια που σχετίζονται με την απόπτωση αλλά και να επάγουν γονίδια που προωθούν την κυτταρική επιβίωση. Η TRAF3, μέλος αυτής της οικογένειας, δεν είχε αρχικά μελετηθεί με διεξοδικό τρόπο αλλά τα τελευταία χρόνια έχει δοθεί τεράστια σημασία στην ανάλυση των λειτουργιών της στο κύτταρο. Ως αποτέλεσμα, τώρα θεωρείται ως μια πρωτεΐνη με πολλαπλούς ρυθμιστικούς ρόλους σε μια ποικιλία σηματοδοτικών μονοπατιών. Παρόλα αυτά, υπάρχουν αρκετά ερωτήματα σχετικά με την ρύθμιση της ίδιας της TRAF3 από άλλους παράγοντες και την λειτουργία της. Η αναγνώριση νέων μορίων που αλληλεπιδρούν με την TRAF3 μπορεί να ρίξει φως στον τρόπο με τον οποίο η TRAF3 ¨στρατολογείται¨ στα διάφορα σηματοδοτικά συμπλέγματα καθώς και πιθανούς τρόπους με τους οποίους ρυθμίζεται η λειτουργία της.
Με την τεχνική ‘yeast-2-hybrid’ αναγνωρίστηκε η πρωτεΐνη Ubc9 ως νέος παράγοντας αλληλεπίδρασης με την TRAF3. Η Ubc9 είναι το μοναδικό E2 ένζυμο που έχει αναγνωριστεί μέχρι στιγμής να συμμετέχει στο μονοπάτι της Σουμουλίωσης (SUMOylation), μιας σημαντικής μετα-μετάφραστικής τροποποίησης. Ο σκοπός αυτού του διδακτορικού ήταν ο χαρακτηρισμός αυτής της αλληλεπίδρασης με λεπτομέρεια. Δείχνουμε ότι η TRAF3 σουμουλιώνεται in vitro και ότι η τροποποίηση αυτή οφείλεται στην Ubc9. Απουσία της τροποποίησης αυτής από την Ubc9 οδηγεί στην σταθεροποίηση του TRAF3 μετά από διέγερση των κυττάρων με CD40 και καθυστέρηση της έναρξης του εναλλακτικού μονοπατιού του NF-κB. Τέλος, ¨κλείσιμο¨ της Ubc9 με την μέθοδο του siRNA οδηγεί σε μειωμένη αλληλεπίδραση της TRAF3 με τον υποδοχέα του CD40, κάτι που οδηγεί στο συμπέρασμα ότι η συγκεκριμένη μετά-μεταφραστική τροποποίηση είναι σημαντική για το σχηματισμό των σηματοδοτικών συμπλεγμάτων που συμμετέχει η TRAF3.
|
Χαρακτηρισμός των μοριακών μονοπατιών που συνδέουν τα μέλη της οικογένειας των TNF υποδοχέων με βασικές κυτταρικές λειτουργίες
