Περίληψη |
Η Sec μεταθετάση είναι ένας καθολικός και απαραίτητος μηχανισμός
πρωτεϊνικής μεταφοράς στα βακτήρια. Το ολοένζυμο της μεταθετάσης αποτελείται από το SecYEG μεμβρανικό κανάλι μετατόπισης και από την ΑΤΡάση του συστήματος, SecA. _ια μέσω του καναλιού αυτού πραγματοποιείται η έκκριση των πρωτεϊνών στον εξωκυττάριο χώρο αλλά και η οριζόντια μεταφορά μεμβρανικών πρωτεϊνών κατά μήκος της λιπιδικής διπλοστιβάδας. Στην αντίδραση προσφέρει ενέργεια το ένζυμο SecΑ πραγματοποιώντας πολλαπλούς κύκλους κατάλυσης υδρολύοντας ATP.
Η SecA αν και ανήκει στην υπεροικογένεια ΙΙ (SF2) των DexD/H ελικασών και
εμφανίζει όλα τα χαρακτηριστικά μοτίβα, παρουσιάζει μια αξιοσημείωτη διαφορά στη δομική οργάνωση του αμινοτελικού άκρου της (NBD). Στην παρούσα εργασία, αρχικά, πραγματοποιείται βιοπληροφορική μελέτη η οποία και αποκαλύπτει τη συντήρηση των φυσικοχημικών ιδιοτήτων του αμινοτελικού άκρου ανάμεσα στα φύλα των βακτηρίων.
Στη συνέχεια, γίνεται μια προσπάθεια διερεύνησης του ρόλου της α1 και α2 έλικας του NBD στην καταλυτική δραστικότητα του ενζύμου αλλά και της συμμετοχής αυτών σε περίπτωση ολιγομερισμού της πρωτεΐνης. Για το σκοπό αυτό δημιουργήθηκαν ελλειπτικά και σημειακά μεταλλάγματα. Τα αποτελέσματα έδειξαν πως οι α1 και α2 έλικες του NBD είναι απαραίτητες για την βιωσιμότητα του κυττάρου καθώς και για τον σχηματισμό της διμερούς μορφής της SecA. Επίσης, η υποκατάσταση σε αλανίνες των επιφανειακών, θετικά φορτισμένων αμινοξέων της α1 έλικας (SecA-6A) επηρεάζει δραματικά την ανάπτυξη των κυττάρων, παρεμποδίζει την ιδανική καταλυτική δραστικότητα του ενζύμου αλλά δεν επηρεάζει τον ολιγομερισμό του ενζύμου. Από τις παρατηρήσεις αυτές προτείνουμε ότι η ακραία, πλούσια σε θετικό φορτίο α1 έλικα της SecA είναι σημαντική και απαραίτητη για την ιδανική λειτουργία του ενζύμου και
συνεπώς τη βιωσιμότητα του κυττάρου λόγω της πιθανής αλληλεπίδρασης του άκρου με το SecYEG κανάλι κατά τη διάρκεια της διαδικασίας μετατόπισης.
|