E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Μοριακή και βιοχημική ανάλυση του γονιδίου AtPA02 που κωδικοποιεί για οξείδαση των πολυαμινών στην Arabidopsis thaliana

Αρχική Μοριακή και βιοχημική ανάλυση του γονιδίου AtPA02 που κωδικοποιεί για οξείδαση των πολυαμινών στην Arabidopsis thaliana

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000336885

Τίτλος

Μοριακή και βιοχημική ανάλυση του γονιδίου AtPA02 που κωδικοποιεί για οξείδαση των πολυαμινών στην Arabidopsis thaliana

Άλλος τίτλος

Molecular and biochemical characterisation of AtPA02 g Gene that codes for a polyamine oxidase in Arabidopsis thaliana

Συγγραφέας

Ανδριοπούλου, Αθηνά

Σύμβουλος διατριβής

Ρουμπελάκη - Αγγελάκη, Καλλιόπη

Περίληψη

Οι πρώτες φυτικές οξειδάσες των πολυαμινών (PAOs), που είχαν χαρακτηριστεί μέχρι πρόσφατα, καταλύουν την οξειδωτική απαμίνωση των ανωτέρων PAs (Spd, Spm). Αντίθετα, στα κύτταρα των θηλαστικών ο καταβολισμός των PAs δεν οδηγεί σε οξείδωση των PAs αλλά ακολουθεί ένα αντίστροφο μονοπάτι. Στοιχεία για την ύπαρξη ανάλογης διαδικασίας στον Arabidopsis thaliana ήρθαν στο φως τα τελευταία έτη μετο χαρακτηρισμό της in vitro δράσης των δύο από τις πέντε PAOs του φυτού, της AtPA01 και AtPA03. Ειδικότερα σε πρόσφατη μελέτη του παρόντος Εργαστηρίου, η AtPA03 δείχτηκε να εντοπίζεται στα περοξεισώματα και να έχει την ικανότητα in vitro μετατροπής της Spm διαδοχικά σε Spd και της Spd σε Put, παράγοντας H₂O₂ και έχοντας έτσι ανάλογο ρόλο με αυτόν της PAO των θηλαστικών. Για την περαιτέρω διαλεύκανση του καταβολικού μονοπατιού των PAs στην A.thaliana, στην παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή, απομονώθηκε και χαρακτηρίστηκε το γονίδιο AtPAO2, καθώς αυτό ανήκει μαζί με το AtPAO3 και το AtPAO4 στην ίδια παραφυλετική ομάδα και έχει 84% ομολογία με το AtPAO3. Το cDNA του AtPAO2 απομονώθηκε και υποκλωνοποιήθηκε, ενώ η πρωτεΐνη που αυτό κωδικοποιεί εκφράστηκε, καθαρίστηκε και προσδιορίστηκαν τα ενζυμικά της χαρακτηριστικά και ο υποκυτταρικός της εντοπισμός. Η AtPAO2 δεν οξειδώνει την Put αλλά έχει την ικανότητα να οξειδώνει τη Spm προς Spd και τη Spd προς Put, με ταυτόχρονη παραγωγή H₂O₂ παρόμοια με όσα έχουν παρατηρηθεί και για την AtPA03. Επιπλέον παρεμποδίζεται από την guazatine, ένα ισχυρό παρεμποδιστή των PAOs. Ωστόσο η AtPA02 εντοπίστηκε στους χλωροπλάστες και όχι στα περοξεισώματα. Περαιτέρω διερεύνηση των επιπέδων έκφρασης του AtPA02 υπό συνθήκες καταπόνησης έδειξε τον διαφρορετικό τρόπο ρύθμισής του συγκριτικά με το AtPA03. Για τη μελλοντική μελέτη της in vivo δράσης του AtPA02 απομονώθηκαν ομόζυγα μεταλλάγματα A.thaliana col-o. Τα παραπάνω αποτελέσματα ενισχύουν την ύπαρξη ενός αντίστροφου μονοπατιού καταβολισμού των PAs στα φυτά με τις χαρκτηρισμένες πρωτε'ινες που συμμετέχουν σε αυτό να παρουσιάζουν διαφορετική ρύθμιση και υποκυτταρική διαμερισματοποίηση στην A.thaliana.

Φυσική περιγραφή

51 σ. : εικ. ; 30 εκ.

Γλώσσα

Ελληνικά

Θέμα

Back-Conversion

PAO

Spermidine

Spermine

Αντίστροφος καταβολισμός

Σπερμίνη

Ημερομηνία έκδοσης