Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Ετερόλογη έκφραση της VIRP1 και μελέτη της ομόλογης της, GTE7, στο φυτό Arabidopsis thaliana  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000434205
Τίτλος Ετερόλογη έκφραση της VIRP1 και μελέτη της ομόλογης της, GTE7, στο φυτό Arabidopsis thaliana
Άλλος τίτλος Heterologous expression of VIRP1 and study of its homolog, GTE7, in Arabidopsis thaliana
Συγγραφέας Φρουδάκη, Μυρσίνη Α.
Σύμβουλος διατριβής Καλαντίδης, Κρίτων
Μέλος κριτικής επιτροπής Μόσχου, Παναγιώτης
Τσαγρή, Ευθυμία
Περίληψη Τα ιοειδή αποτελούν μύα ιδιαίτερη κατηγορία παθογόνων που προσβάλλουν αποκλειστικά ανώτερα φυτά. Πρόκειται για μικρά, κυκλικά, μονόκλωνα RNAs τα οποία δεν κωδικοποιούν καμία πρωτεΐνη και ως εκ τούτου είναι πλήρως εξαρτώμενα από παράγοντες των ξενιστών τους. Τα ιοειδή δύνανται να προάγουν τη σύνδεση τους με ενδογενείς παράγοντες, και η αδυναμία πρόσδεσης ενός ιοειδούς σε έναν τέτοιο παράγοντα αρκεί για τη διατάραξη του βιολογικού κύκλου του ιοειδούς, και την επαγωγή ανθεκτικότητας του φυτού απέναντι σε αυτό. Η πρωτεΐνη VIRP1 (Viroid-RNA Binding Protein 1) συνιστά μία υψηλά συντηρημένη πρωτεΐνη των Solanaceae με μείζονα ρόλο στο βιολογικό κύκλο των ιοειδών Pospiviroid σε αυτά. Η VIRP1 φέρει τις δύο χαρακτηριστικές επικράτειες της οικογένειας μεταγραφικών ρυθμιστών ΒΕΤ, δηλαδή μία βρομο- επικράτεια και ένα μοτίβο NET (N-Extra-Terminal) και έχει πυρηνικό εντοπισμό. Τόσο ο ενδογενής της ρόλος, όσο και η ακριβής εμπλοκή της στο βιολογικό κύκλο των Pospiviroid παραμένουν άγνωστα. Ωστόσο, ένα σύνολο στοιχείων υποστηρίζει την υπόθεση εμπλοκής της VIRP1 στη μεταφορά των ιοειδών, ενδεχομένως σε ενδοκυτταρικό, ή ακόμη και σε ενδο-πυρηνικό επίπεδο. Η πρόσδεση του ιοειδούς από τη VIRP1 εμπλέκει δύο δομικά στοιχεία: το χαρακτηριστικό μοτίβο RY που απαντάται σε όλα τα ιοειδή του πυρήνα (οικογένεια Pospiviroidae) και μία άτυπη επικράτεια πρόσδεσης RNA της VIRP1. Η επικράτεια αυτή εμφανίζεται συντηρημένη σε ομόλογες πρωτεΐνες της VIRP1, προερχόμενες από είδη- ξενιστές των Pospiviroidae. Αντιθέτως, στην περίπτωση του παράγοντα GTE7, της γειτνιέστερης ομόλογης της VIRP1 στο Arabidopsis thaliana, η ομολογία διατηρείται υψηλή στις επικράτειες βρομο και NET, ενώ μειώνεται έντονα στην περιοχή που αντιστοιχεί στην άτυπη επικράτεια πρόσδεσης RNA. Ταυτόχρονα, το A.thaliana είναι πλήρως ανθεκτικό έναντι των ιοειδών, παρόλο που διαθέτει το πλήρες ενζυμικό υπόβαθρο για τον πολλαπλασιασμό των ιοειδών του πυρήνα. Στο πλαίσιο της παρούσας εργασίας, δημιουργήθηκαν διαγονιδιακά Arabidopsis VIRP1, που υπερεκφράζουν την πρωτεΐνη VIRP1 της τομάτας (Lycopersicon esculentum). Τα φυτά αυτά θα χρησιμοποιηθούν σε πειράματα μολύνσεων με ιοειδή του γένους Pospiviroid, προκειμένου να ελεγχθεί εάν η ετερόλογη έκφραση της VIRP1 μπορεί να επιτρέψει τη μόλυνση των Arabidopsis. Ταυτόχρονα, οι πρωτεΐνες AtGTE7, LeVIRP1 και LeVIRP1A (από την οποία απουσιάζει η επικράτεια πρόσδεσης RNA) κλωνοποιήθηκαν σε μεταφραστική σύντηξη με τον πρωτεϊνικό επίτοπο FLAG, ώστε να ελεγχθεί με πειράματα ανοσοκατακρήμνισης εάν η GTE7 διατηρεί την ικανότητα πρόσδεσης ιοειδών που εμφανίζει η ομόλογή της, VIRP1. Στο σύνολό τους, οι δύο πειραματικές διατάξεις επιχειρούν να αποσαφηνίσουν εάν ο αιτιολογικός παράγοντας για την ανθεκτικότητα του Arabidopsis έναντι των Pospiviroid είναι η αδυναμία των ιοειδών να προσδεθούν στον παράγοντα GTE7, που αντιπροσωπεύει τη γειτνιέστερη ενδογενή ομόλογη της VIRP1 στο Arabidopsis. Επιπλέον, με τη δημιουργία των διαγονιδιακών Arabidopsis Virp1 εξασφαλίζεται ένα εύχρηστο ετερόλογο σύστημα για τη μελέτη του ενδογενούς ρόλου της VIRP1. Τέλος, εάν τα διαγονιδιακά φυτά αποδειχθούν ικανά να λειτουργήσουν ως ξενιστές των ιοειδών αυτών, τότε η παρούσα διπλωματική εργασία θα έχει συνεισφέρει στη εγκαθίδρυση ενός προνομιακού βιολογικου συστήματος για τη μελέτη των ιοειδών Pospiviroid, και ενδεχομένως ολόκληρης της οικογένειας Pospiviroidae.
Φυσική περιγραφή 44 φύλλα : πίν., σχήμ., εικ. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα BET family of transcriptional regulations
Binding of viroids
Pospiviroidae
Οικογένεια μεταγραφικών ρυθμιστών BET
Πρόσδεση ιοειδών
Ημερομηνία έκδοσης 2020-11-27
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 46

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Κατέβασμα Εγγράφου
Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 1