Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Engineering an (R)-selective amine transaminase for the acceptance of bulky substrates  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000446595
Τίτλος Engineering an (R)-selective amine transaminase for the acceptance of bulky substrates
Άλλος τίτλος Δημιουργία μιας (R)-εκλεκτικής τρανσαμινάσης αμινών για την μετατροπή ογκώδων υποστρωμάτων
Συγγραφέας Κόνια, Ελένη Ι.
Σύμβουλος διατριβής Παυλίδης, Ιωάννης
Μέλος κριτικής επιτροπής Τσιώτης, Γεώργιος
Mutti, Francesco
Περίληψη Τρανσαμινάσες ή αμινοτρανσφεράσες ονομάζονται τα ένζυμα που καταλύουν αντιδράσεις απαμίνωσης αμινοξέων ή πρωτοταγών αμινών (δότης) προς σχηματισμό της αντίστοιχης καρβονυλικής ένωσης. Η αμινομάδα που διασπάται μεταφέρεται σε μια δεύτερη καρβονυλική ένωση (δέκτης) σχηματίζοντας μια νέα αμίνη ή αμινοξύ. Στην μεταφορά της αμινομάδας μεταξύ των δύο ενώσεων συμμετέχει ο συμπαράγοντας φωσφορικής πυριδοξάλης (PLP). Οι ενζυμικά καταλυώμενες αντιδράσεις τρανσαμίνωσης πλεονεκτούν σε σχέση με άλλες αντιδράσεις σύνθεσης αμινών καθώς η αντίδραση πραγματοποιείται εναντιοεκλεκτικά. Ιδιαίτερα οι τρανσαμινάσες πρωτοταγών αμινών έχουν βρει εφαρμογή στη βιομηχανία για την παραγωγή οπτικά καθαρών αμινών που αποτελούν πρόδρομες ενώσεις φαρμάκων ή αγροχημικών. Τα ένζυμα αυτά μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως καταλύτες, είτε με σκοπό τον κινητικό διαχωρισμό ρακεμικών μειγμάτων πρωτοταγών αμινών, είτε για την ασύμμετρη σύνθεση χειρόμορφων αμινών από προχειρόμορφες κετόνες ή αλδεΰδες. Στο ενεργό τους κέντρο, οι τρανσαμινάσες διαθέτουν δύο κοιλότητες, η κάθε μια από τις οποίες δρα ως θέση πρόσδεσης του ενός από τους δυο υποκαταστάτες της χειρόμορφης πρωτοταγούς αμίνης ή της προχειρόμορφης καρβονυλικής ένωσης. Επειδή διαφέρουν σε μέγεθος, είναι γνωστές ως η μεγάλη και η μικρή θέση πρόσδεσης. Χάρη σε αυτή την αρχιτεκτονική τα υποστρώματα προσδένονται με αυστηρή γεωμετρία γεγονός που εξασφαλίζει την εναντιοεκλεκτικότητα της αντίδρασης. Ωστόσο συχνά παρατηρείται ότι η μικρή θέση δεν μπορεί να προσδέσει υποκαταστάτες μεγαλύτερους της αίθυλο-ομάδας. Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι ο λογικός ανασχεδιασμός της (R)-εναντιοεκλεκτικής τρανσαμινάσης από τον οργανισμό Luminiphilus syltensis (LS_ATA). Ξεκινώντας από την κρυσταλλική δομή του ενζύμου δημιουργήσαμε ένα μοντέλο της πρωτεΐνης σε μια από τις ενδιάμεσες καταστάσεις του συμπλόκου PLP-υποστρώματος από την οποία διέρχεται η αντίδραση πριν οδηγηθεί σε προϊόν. Η ενδιάμεση αυτή κατάσταση είναι γνωστή ως κινονοειδές ενδιάμεσο και δημιουργήθηκε μέσω της μεθόδου μοριακής δυναμικής προσομοίωσης. Ως υπόστρωμα χρησιμοποιήθηκε η (R)-1-φαινυλεθυλαμινη (υπόστρωμα αναφοράς). Στη συνέχεια επεκτείναμε in silico τον άλκυλο υποκαταστάτη του υποστρώματος στη μικρή θέση πρόσδεσης. Τρία αμινοξικά κατάλοιπα της μικρής θέσης πρόσδεσης (V37, S248, T249) επιλέχθηκαν για μεταλλαξιγένεση. Το μετάλλαγμα V37A χρησιμοποιήθηκε σε μικρής κλίμακας αντιδράσεις και παρουσίασε δραστικότητα ως προς την (R)-1-φαινυλβουτυλαμίνη η οποία δεν γίνεται δεκτή από το φυσικού τύπου ένζυμο. Μεταλλαγή των θέσεων 248 και 249 οδηγεί σε λιγότερο ή καθόλου ενεργά ανασυνδιασμένα ένζυμα. Η παρουσία πολικών αμινοξέων στις θέσεις αυτές είναι μάλλον καθοριστική για την πρόσδεση του συμπαράγοντα.
Φυσική περιγραφή 62 σ. : πίν., σχήμ., εικ. (μερ. εγχρ.) ; 30 εκ.
Γλώσσα Αγγλικά
Θέμα Biocatalysis
Luminiphilus syltensis
Rational design
Site directed mutagenesis
Βιοκατάλυση
Πρωτεϊνική μηχανική
Τοποειδική μεταλλαξηγένηση
Ημερομηνία έκδοσης 2022-03-28
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 30

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Κατέβασμα Εγγράφου
Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 1