Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Γενετική και βιοχημική ανάλυση της οξειδωτικής αναδίπλωσης πρωτεϊνών στα μιτοχόνδρια  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000376319
Τίτλος Γενετική και βιοχημική ανάλυση της οξειδωτικής αναδίπλωσης πρωτεϊνών στα μιτοχόνδρια
Άλλος τίτλος Genetic and biochemical analysis of the oxidotine folding of proteins in mitochondria
Συγγραφέας Κάλεφ- Εζρά, Έστερ Τζω.
Σύμβουλος διατριβής Τοκατλίδης, Κώστας
Αλεξανδράκη, Δέσποινα
Περίληψη Οι περισσότερες μιτοχονδριακές πρωτεΐνες κωδικοποιούνται από πυρηνικά γονίδια, μεταφράζονται στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου και στη συνέχεια εισέρχονται στα μιτοχόνδρια. Ορισμένες από τις πρωτεΐνες του διαμεμβρανικού χώρου των μιτοχονδρίων εισέρχονται μέσω του μονοπατιού MIA (intermembrane space import and assembly machinery). Οι πρωτεΐνες-υποστρώματα του μονοπατιού MIA αφού περάσουν την εξωτερική μεμβράνη, οξειδώνονται από την πρωτεΐνη Mia40 και παγιδεύονται στο διαμεμβρανικό χώρο. Στη συνέχεια, η σουλφυδριλική οξειδάση Erv1/ALR επανοξειδώνει τη Mia40 με τελικό αποδέκτη των ηλεκτρονίων το Ο2 ή το κυτόχρωμα-c. Στα πλαίσια της παρούσας εργασίας: 1. Προκαλέσαμε οξειδωτικό στρες σε κύτταρα και απομονωμένα μιτοχόνδρια του σακχαρομύκητα S. cerevisiae και μελετήσαμε τις ποσοτικές μεταβολές των πρωτεϊνών Mia40, Erv1 και cyt-c στα εν λόγω κύτταρα και αναλύσαμε τη βιωσιμότητά τους. Βρέθηκε μεγαλύτερη ευαισθησία των κυττάρων και των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών τους στο οξειδωτικό στρες στα κύτταρα που αναπτύσσονται σε θρεπτικό μέσο που μεταβολίζεται στο κυτταρόπλασμα σε σχέση με αυτήν των κυττάρων σε μέσο που μεταβολίζεται στα μιτοχόνδρια. 2. Με αναζήτηση στην υπάρχουσα βιβλιογραφία εντοπίσαμε στις πρωτεΐνες Erv1/ALR και Mia40 την ύπαρξη εξελικτικά συντηρημένων μοτίβων κοντά στα καταλυτικά τους δισουλφίδια και εντοπίσαμε μορφές μικρού και πλήρους μήκους που οφείλονται σε εναλλακτικό μάτισμα μόνο στις πρωτεΐνες ALR των θηλαστικών. 3. Μεταλλάξαμε το πλούσιο σε αργινίνες μοτίβο Rx4Rx4Rx6Rx4R της ανθρώπινης ALR σε αλανίνες για να μελετηθεί σε μελλοντικά πειράματα αν αυτό το μοτίβο είναι σημαντικό για τη διαμερισματοποίηση των δύο μορφών της ALR στα ανθρώπινα κύτταρα. 4. Μελετήσαμε την ικανότητα των πρώτων 72 αμινοξέων της πρωτεΐνης Erv1 του S. cerevisiae όσον αφορά την ικανότητά τους να εισάγουν μη μιτοχονδριακές πρωτεΐνες (DHFR, NHP6A) στα μιτοχόνδρια και βρέθηκε ελάχιστο έως καθόλου σήμα εισόδου για τις συνθήκες κάτω από τις οποίες έγιναν τα πειράματα. 5. Έγιναν περεταίρω μεταλλαγές στην Erv1 του S. cerevisiae και στην ανθρώπινη ALR με στόχο να μελετηθεί σε μεγαλύτερη λεπτομέρεια η διαδικασία στόχευσης αυτών των πρωτεϊνών στα κύτταρα. Συγκεκριμένα, μεταλλάξαμε την ισολευκίνη στη θέση 22 σε λυσίνη και ασπατρικό οξύ της πρωτεΐνης Erv1 του S. cerevisiae και βρέθηκε ότι όταν έχουν τις εν λόγω μεταλλάξεις, τα πρώτα 72 αμινοξέα της Erv1 μπορούν να εισάγουν καλύτερα το μη μιτοχονδριακό DHFR στα μιτοχόνδρια. Επίσης μεταλλάξαμε το πλούσιο σε αργινίνες μοτίβο Rx4Rx4Rx6Rx4R της ανθρώπινης ALR σε αλανίνες για να μελετηθεί η σημασία του σε 10 μελλοντικά πειράματα. Τέλος, δημιουργήσαμε τις πλασμιδικές κατασκευές pEGFP-N1-N72(Erv1), pEGFP-N1-cytb2(Ν85), pEGFP-N1-Erv1, pEGFP-N1-N80(ALR) για να για να μελετηθεί σε μελλοντικά πειράματα η ικανότητα διαμερισματοποίησης των πρωτεϊνών ALR του ανθρώπου (lf-ALR, sf-ALR) καθώς και της ομόλογής της του σακχαρομύκητα S. cerevisiae Erv1 σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές
Φυσική περιγραφή 68 σελ. : έγχ. εικ., πίν. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα Import
Pathway
Είσοδος
ΜΙΑ
Μονοπάτι
Ημερομηνία έκδοσης 2012-11-16
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 52

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 1