Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Λειτουργική ανάλυση της φυτικής ERI1 : ERL1 (ERI1-LIKE 1)  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000351249
Τίτλος Λειτουργική ανάλυση της φυτικής ERI1 : ERL1 (ERI1-LIKE 1)
Άλλος τίτλος Functional analysis of the plant ERI1
Συγγραφέας Λαγιώτης, Γεώργιος Δ.
Σύμβουλος διατριβής Καλαντίδης, Κ
Περίληψη Η «RNA σίγηση» είναι ένας διαοργανισμικός μοριακός μηχανισμός που διαμεσολαβείται από μία πληθώρα πρωτεϊνικών συμπλόκων, δρώντας «κατασταλτικά» σε συγκεκριμένες αλληλουχίες νουκλεϊκών οξέων, μέσω της καθοδήγησης αντικωδικών RNAs (antisense RNAs) των ~20-33 nt. Η «RNA σίγηση» δεν είναι ένας πανομοιότυπος μοριακός μηχανισμός μεταξύ των διάφορων οργανισμών. ΢ε καθένα από αυτούς εμφανίζει τις εξελικτικές του ιδιαιτερότητες. Πέραν από τις πρωτεΐνες, τα RNA και, γενικότερα, όλους εκείνους τους παράγοντες που συμβάλουν θετικά στην «RNA ΢ίγηση», παράλληλα υφίστανται και παράγοντες που την παρεμποδίζουν/ ρυθμίζουν. Αυτοί οι παράγοντες διακρίνονται σε εξωγενείς και ενδογενείς. ΢τους εξωγενείς συγκαταλέγονται κυρίως πρωτεΐνες ιών, ενώ στους ενδογενείς πρωτεΐνες του ίδιου του φυτού. Μεταξύ αυτών των ενδογενών πρωτεϊνών και η φυτική ERL1 (ERI1-LIKE 1), ορθόλογη της ERI1 (ENHANCED RNAi 1), μία 3’→ 5’ Εξωνουκλεάση, που εντοπίστηκε για πρώτη φορά σε γενετικές σαρώσεις στο C. elegans για μεταλλάγματα με υπερευαισθησία σε dsRNA. Από εκεί και έπειτα, ανιχνεύθηκαν ορθόλογες αυτής και σε άλλους ευκαρυώτες, όπως M. musculus (MmERI1), D. melanogaster (Snipper), N. crassa (QIP), H. sapiens (Thex1/3’hExo), όπως επίσης και στα φυτά. Οι ERI1s πρωτεΐνες χαρακτηρίζονται από την παρουσία μίας ERI 1_3’hExo επικρατειας RNάσης τύπου H, και μίας αμινοτελικά εντοπιζόμενης SAP (SAF επικράτειας, για πρόσδεση δίκλωνου RNA/ DNA. Η παρουσία ή η απουσία της SAP (SAF A/B/ Acinus/ PIAS) επικράτειας, ομαδοποιεί τις ERI1s σε Ομάδας Ι και Ομάδας ΙΙ ERI1s, αντίστοιχα. H ERL1 (ERI1- LIKE 1) της A. thaliana, AtERL1, φέρει επίσης και ένα αμινοτελικά εντοπιζόμενο πεπτίδιο σινιάλο για μετακίνηση στο χλωροπλάστη, που θεωρείται ένα υποκυτταρικό διαμέρισμα ελεύθερο της «RNA σίγησης». Η ERL1 είναι πολύ πιθανό να συμμετέχει σε διαφορετικά μοριακά μονοπάτια από αυτά της ρύθμισης της «RNA σίγησης». Γεγονός, που φαίνεται πολύ πιθανό, από πιλοτικά πειράματα του εργαστηρίου, λόγω αδυναμίας της πρωτεΐνης να επηρεάσει την έκβαση της «σίγησης», λόγω του υποκυτταρικού εντοπισμού της, αλλά και από την παρουσία 5S rRNA μορίων μεγαλύτερων κατά 2 nt στο 3’- άκρο τους, σε φυτά που εξέφραζαν εκτοπικά την ERL1. 7 ΢τη παρούσα Μεταπτυχιακή Εργασία, με «κίνητρο» τα μέχρι τώρα διαθέσιμα αποτελέσματα, αλλά και πρόσφατες δημοσιεύσεις σε ζωικές ERI1s για τη συμμετοχή των αντίστοιχων ERI1s στην ωρίμανσης του 3’- άκρου του 5.8S rRNA, επιχειρήθηκαν μία σειρά από πειράματα, ώστε να μελετηθεί η πιθανή δράση της ERL1 (ERI1- LIKE 1) πρωτεΐνης της A. thaliana σε διάφορα υποστρώματα. Πρωταρχικό μέλημα ήταν ο μη- αποδιατακτικός καθαρισμός της εν λόγω πρωτεΐνης με χρωματογραφία συγγένειας, αλλά και ο ταυτόχρονος καθαρισμός της ορθόλογής της από το M. musculus (MmERI1), η οποία επιλέχθηκε ως θετικός μάρτυρας (+ control), για μελέτη της πιθανής συμμετοχής της AtERL1 στην «ωρίμανση» του 3’- άκρου του χλωροπλαστικού 5S rRNA, όπως και στη περίπτωση της MmERI με το 5.8S rRNA. Δυστυχώς, λόγω τεχνικών προβλημάτων «αποδόμησης» κατά τη προσομοίωση/ επανάληψη των πειραμάτων των Ansel et al. 2008, δεν ήμασταν σε θέση να ολοκληρώσουμε τον παραπάνω πειραματικό σχεδιασμό. Παράλληλα, προσπαθήσαμε να εντοπίσουμε την ERL1, με τεχνική στυπώματος κατά Western, σε φυτά N. benthamiana αγρίου τύπου (WT). Παρ’ όλα αυτά, μετά από μία μεγάλη γκάμα διαφορετικών στυπωμάτων, ακόμα και σε αυτά με πρωτεϊνικά εκχυλίσματα από απομονωμένους χλωροπλάστες, η ανίχνευσή της ήταν αδύνατη. Σέλος, επειχειρήθηκε η ανίχνευση των πρωτεϊνικών επιπέδων της ERL1 από φυτικές σειρές που υπερεκφράζουν συστατικά την AtERL1, συγκεκριμένα στις «Mosaic», «Bleach» και «No- Phenotype», γιατί εμφανίζουν μωσαϊκό λευκών και πράσινων κηλίδων στα φύλλα τους, φέρουν εξολοκλήρου λευκά φύλλα, και δεν φέρουν κάποιο χαρακτηριστικό φαινότυπο, αντίστοιχα. Παρόλο που τα «Bleach» και «Mosaic», κατά προσέγγιση εμφανίζουν τα ίδια πρωτεϊνικά επίπεδα, στη «No- Phenotype» σειρά τα πρωτεϊνικά επίπεδα είναι σημαντικά μειωμένα, περί το ήμισυ. Γεγονός, που θα μπορούσε να εξηγήσει, ίσως, την «ανικανότητα» των «No- Phenotype» N. benthamiana φυτών να εκφράσουν κάποιο χλωρωτικό φαινότυπο.
Φυσική περιγραφή 79 σ. : εικ. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα 5.8S rRNΑ
5S rRNA
ERL1 Western
Maturation
Ωρίμανση
Ημερομηνία έκδοσης 2009-11-20
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
  Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης
Εμφανίσεις 272

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 1