E-Locus - Ιδρυματικό Καταθετήριο Πανεπιστημίου Κρήτης - Functional analysis and characterization of insecticide target and detoxification proteins in insect pests and disease vectors

Αρχική Functional analysis and characterization of insecticide target and detoxification proteins in insect pests and disease vectors

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

[Προσθήκη στο καλάθι]

Κωδικός Πόρου

000409568

Τίτλος

Functional analysis and characterization of insecticide target and detoxification proteins in insect pests and disease vectors

Άλλος τίτλος

Λειτουργική ανάλυση και χαρακτηρισμός στόχου εντομοκτόνων και πρωτεϊνών αποτοξικοποίησης σε επιβλαβή έντομα και φορείς ασθενειών

Συγγραφέας

Πιπίνη, Δήμητρα Μ.

Σύμβουλος διατριβής

Βόντας, Ιωάννης

Μέλος κριτικής επιτροπής

Μπουριώτης, Βασίλειος
Λάμπρου, Νικόλαος

Περίληψη

Τα επιβλαβή έντομα αποτελούν απειλή για τη δημόσια υγεία και την γεωργία καθώς μεταφέρουν εντομομεταδιδόμενες ασθένειες και καταστρέφουν τις καλλιέργειες. Η καταπολέμησή τους βασίζεται κυρίως στη χρήση χημικών εντομοκτόνων. Ωστόσο, η συχνή τους εφαρμογή έχει οδηγήσει σε πολλά προβλήματα, μεταξύ των οποίων η ανάπτυξη ανθεκτικότητας στα εντομοκτόνα – η οποία επιτυγχάνεται κυρίως μέσω της δράσης των ενζύμων αποτοξικοποίησης και μεταλλαγές στις πρωτεΐνες-στόχους των εντομοκτόνων – καθώς και επιδράσεις στην υγεία και το περιβάλλον. Έτσι, η κατανόηση των μηχανισμών που διέπουν την ανθεκτικότητα στα εντομοκτόνα καθώς και η ανάπτυξη νέων μεθόδων για την καταπολέμηση των εντόμων, πιο αποτελεσματικών, επιλεκτικών και φιλικών προς το περιβάλλον αποτελούν επείγουσα ανάγκη. Σε αυτήν την εργασία, χρησιμοποιήσαμε μοριακές τεχνικές, προσεγγίσεις για την έκφραση πρωτεϊνών καθώς και βιοχημικές/λειτουργικές μελέτες για α) τη διερεύνηση των μηχανισμών αποτοξικοποίησης εντομοκτόνων ουσιών σε κουνούπια-φορείς ανθρώπινων ασθενειών και β) την προσπάθεια λειτουργικής έκφρασης του ενζύμου απακετυλάση χιτίνης από παράσιτο της γεωργίας ώστε να μπορέσουμε να αξιολογήσουμε περαιτέρω το ρόλο του ενζύμου ως πιθανό στόχο για νέα παρασιτοκτόνα. Αρχικά, τρεις UGTs από κουνούπια-φορείς ανθρώπινων ασθενειών, οι οποίες έχουν συσχετιστεί με την ανθεκτικότητα σε εντομοκτόνα, κλωνοποιήθηκαν και εκφράστηκαν ετερόλογα σε κύτταρα εντόμων με τη χρήση του συστήματος έκφρασης με βακουλοϊούς και ελέγχθηκαν για την ικανότητά τους να γλυκοζυλιώνουν γνωστούς μεταβολίτες εντομοκτόνων. Από το κουνούπι Anopheles gambiae, τον κύριο φορέα της ελονοσίας, η πρωτεΐνη AgUGT1 η οποία έχει συσχετιστεί με την ανθεκτικότητα σε πυρεθροειδή εντομοκτόνα εκφράστηκε επιτυχώς και ελέγχτηκε ως προς την δράση της έναντι στους μεταβολίτες πυρεθροειδών: 3-φαινοξυβένζυλ αλκοόλη (PBAlc) και 3-φαινοξυβενζοϊκό οξύ (ΡΒΑ). Οι πρωτεΐνες Aealbo_UGT1 και Aealbo_UGT2 από το ασιατικό κουνούπι τίγρης Aedes albopictus, φορέα ιών όπως ο δάγκειος πυρετός, οι οποίες έχουν συσχετιστεί με την ανθεκτικότητα στο οργανοφωσφορικό εντομοκτόνο τέμεφος, εκφράστηκαν επιτυχώς και όπως η AgUGT1, έδειξαν ενεργότητα γλυκοζυλτρανσφεράσης προς το ένα γενικό υπόστρωμα για τις UGTs, το a-naphthol. Στο δεύτερο κεφάλαιο, προσπαθήσαμε να εκφράσουμε και να χαρακτηρίσουμε λειτουργικά μια πιθανή απακετυλάση χιτίνης από το σκουλήκι του βαμβακιού Helicoverpa armigera ώστε να την μελετήσουμε περαιτέρω ως πιθανό στόχο για τον σχεδιασμό και την ανάπτυξη νέων φυτοφαρμάκων.

Φυσική περιγραφή

71 φύλλα : σχεδ., πίν., εικ. (μερ. έγχ.) ; 30 εκ.

Γλώσσα

Αγγλικά

Θέμα

Chitin deacetylase

Detoxification enzymes

UDP-Glucosyltransferase

UDP-Γλυκοζυλτρανσφεράσες

Ένζυμα αποτοξικοποίησης

Απακετυλάσες χιτίνης

Στόχοι εντομοκτόνων