Περίληψη |
Οι ενισχυτές είναι ρυθμιστικά στοιχεία που λειτουργούν κατά κύριο λόγο σε σις. Έχουν
όμως βρεθεί περιπτώσεις όπου συμμετέχουν σε τρανς αλληλεπιδράσεις και μία από αυτές
είναι η transvection. Η transvection είναι ένα φαινόμενο που οδηγεί στη τρανς ρύθμιση της
μεταγραφής ενός γονιδίου από ενισχυτές και άλλες ρυθμιστικές αλληλουχίες του ομόλογου
γενετικού τόπου, επωφελούμενο το ταίριασμα των ομόλογων χρωμοσωμάτων σε σωματικά
κύτταρα στα δίπτερα. Έρευνες έδειξαν ότι ο μονωτής GYI, ζευγαρώνοντας με τον εαυτό του
στο ομόλογο χρωμόσωμα, συμβάλλει στην πραγματοποίηση της transvection. Στην εργασία
αυτή θελήσαμε να μελετήσουμε περαιτέρω την συσχέτιση μονωτών και transvection.
Πρώτα, εξετάσαμε την αποτελεσματικότητα της transvection μέσω του GYI σε όλο το
γονιδίωμα, με την χρήση ενός συνδυασμού GYI πλασμιδιακών κατασκευών που
προηγούμενες έρευνες έδειξαν ότι προκαλεί transvection στη θέση attP2 και attp40. Με την
εισαγωγή αυτού το πλασμιδιακού συνδυασμού αυτού σε τέσσερις ακόμη θέσεις,
καταλήξαμε ότι πράγματι ο GYI μονωτής μπορεί να προκαλέσει transvection σε όλο το
γονιδίωμα. Έπειτα μελετήσαμε την συμβολή του GYI στην εκτοπική έκφραση των
γονιδιακών ανταποκριτών στους ιστούς, η οποία μάλλον προέρχεται από γειτονικούς
ενισχυτές. Βρέθηκε ότι ο GYI μπορεί να προκαλέσει transvection και να επηρεάσει
συγχρόνως την εκτοπική έκφραση των διαγονιδίων, είτε θετικά είτε αρνητικά. Επίσης,
μελετήσαμε την συμμετοχή άλλων μονωτών πέρα του GYI στην transvection. Για την
εξέταση του φαινομένου χρησιμοποιήθηκε μία κατασκευή με δύο ενισχυτές εκατέρωθεν
ενός μονωτή και μία πλασμιδιακή κατασκευή με δύο γονίδια εκατέρωθεν του ίδιου
μονωτή, που εισήχθησαν στον ίδιο γενετικό τόπο στα ομόλογα χρωμοσώματα.
Συγκεκριμένα ασχοληθήκαμε με τους μονωτές Fab-8 και scs’. Τα πειράματα έδειξαν ότι ο
μονωτής Fab-8 μπορεί να προκαλέσει έντονη transvection ενώ ο scs’ αδύναμη. Τέλος,
βρέθηκε διακριτή ρύθμιση των δύο ανταποκριτών από τους δύο ενισχυτές που υποδηλώνει
ύπαρξη φοράς στην transvection.
|