| Περίληψη |
Τα μιτοχόνδρια είναι οργανίδια των ευκαρυωτικών κυττάρων που περιέχουν δύο μεμβράνες, την εξωτερική και την εσωτερική, οι οποίες περιβάλλουν δύο διαμερίσματα, την μήτρα και τον διαμεμβρανικό χώρο. Πρωτεΐνες σχετικά μικρού μοριακού βάρους, που εντοπίζονται στο διαμεμβρανικό χώρο, συχνά περιέχουν συντηρημένα κυστεινικά κατάλοιπα που σχηματίζουν CXn C μοτίβα [53]. Τέτοιες πρωτεΐνες εκτελούν σημαντικές λειτουργίες του κυττάρου, συμπεριλαμβανομένου την συγκρότηση της αναπνευστικής αλυσίδας και την βιογένεση των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών. Η είσοδος τους προωθείται μέσω ενός μονοπατιού ανταλλαγής δισουλφιδίων στον διαμεμβρανικό χώρο, γνωστό ως Mitochondrial Intermembrane space Assembly (MIA) machinery. Συστατικά αυτού του συστήματος που παγιδεύει τις πρόδρομες πρωτεΐνες στα μιτοχόνδρια, είναι η οξειδάση Mia40 και η σουλφυδριλοξειδάση Erv1 [11, 54].
Η Mia40 είναι η πρωτεΐνη κλειδί που εισάγει τις δισουλφιδικές γέφυρες στα υποστρώματα κατά το πέρασμά τους στο διαμεμβρανικό χώρο, καθώς με αυτό τον τρόπο τις ‘κλειδώνει’ σε μια αναδιπλωμένη διαμόρφωση (οξειδωτική αναδίπλωση). Περιέχει έξι συντηρημένες κυστεΐνες, οι οποίες σχηματίζουν το ενεργό κέντρο CPC και ένα διπλό δομικό CX9C μοτίβο. Από την άλλη, η Erv1 είναι μια πρωτεΐνη εξαρτώμενη από το FAD που οξειδώνει την Mia40 στην ενεργή της μορφή.
Σε αυτή την μελέτη, ο κύριος στόχος ήταν να διερευνήσουμε τον μοριακό μηχανισμό και τους καθοριστικούς παράγοντες της βιογένεσης της Mia40. Συνεπώς, επιχειρούμε να ορίσουμε τα στάδια εισόδου της Mia40 στο διαμεμβρανικό χώρο. Η μελέτη περιλαμβάνει in vitro πειράματα εισόδου σε απομονωμένα μιτοχόνδρια από κύτταρα σακχαρομύκητα, in vivo πειράματα με
κύτταρα σακχαρομύκητα του στελέχους GALMia40 και πειράματα θερμιδομετρίας ισοθερμικής τιτλοδότησης (Isothermal Titration Calorimetry) με απομονωμένες πρωτεΐνες.
|
Μηχανισμός βιογένεσης της μιτοχονδριακής οξειδάσης-σαπερόνης ΜΙΑ40
