Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Δημιουργία Βιβλιοθηκών έκφρασης αντισωμάτων σε φάγους και απομόνωση ανθρωπίνων ANTI-MUC1 ανασυνδυασμένων αντισωμάτων  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου uch.med.phd//2001kandilogiannaki
Τίτλος Δημιουργία Βιβλιοθηκών έκφρασης αντισωμάτων σε φάγους και απομόνωση ανθρωπίνων ANTI-MUC1 ανασυνδυασμένων αντισωμάτων
Συγγραφέας Κανδηλογιαννάκη, Μαρία
Περίληψη Στόχος της μελέτης ήταν η απομόνωση και ο χαρακτηρισμός ανθρώπινων ανασυνδυασμένων αντισωμάτων ειδικών για διάφορα μέλη της οικογένειας των ανθρώπινων βλεννινών. Οι γλυκοπρωτείνες αυτές χαρακτηρίζονται από υψηλό βαθμό γλυκοσιλίωσης και μεγάλο μοριακό βάρος. Η υπερέκφραση τους σε καρκινικά κύτταρα σε συνδυασμό με την περιορισμένη γλυκοσιλίωση, καθιστά τις βλεννίνες και συγκεκριμένα τη MUC1 βλεννίνη, σημαντικούς καρκινικούς μάρτυρες. Για το σκοπό αυτό οργανώθηκε η μεθοδολογία, ώστε να αναπτυχθεί η τεχνολογία της παρουσίασης αντισωμάτων στην επιφάνεια βακτηριοφάγων (phage display). Η παρουσίαση αντισωμάτων και γενικότερα πεπτιδίων στην επιφάνεια του βακτηριοφάγου Μ13 είναι μια πολυδύναμη τεχνολογία που δίνει τη δυνατότητα επιλογής γονιδίων με βάση τις ιδιότητες των πολυπεπτιδικών αλυσίδων που αυτά κωδικοποιούν. Έτσι είναι δυνατό να κατασκευαστούν βιβλιοθήκες ανθρώπινων αντισωμάτων in vitro, οι οποίες στη συνέχεια επιλέγονται με τον κατάλληλο αντιγονικό επίτοπο. Στα πλαίσια αυτής της τεχνολογίας κατασκευάστηκαν βιβλιοθήκες αντισωμάτων με τη μορφή Fab και scFv από ανθρώπινα Β λεμφοκύτταρα τα οποία είχαν ανοσοποιηθεί in vitro με τις VNTR (μεταβαλλόμενος αριθμός επαναλήψεων της σταθερής πεπτιδικής περιοχής) περιοχές της MUC1 και της MUC2 βλεννίνης. Η ανοσοποίηση αποσκοπούσε στον εμπλουτισμό του κυτταρικού πληθυσμού σε Β λεμφοκύτταρα που εκφράζουν αντισώματα ειδικά προς τον υπό μελέτη αντιγονικό επίτοπο. Η επιλογή των ανοσοποιημένων βιβλιοθηκών με συνθετικό 100μερές MUC1 πεπτίδιο (5 VNTR) και 46μερές MUC2 πεπτίδιο (2 VNTR) οδήγησε στην απομόνωση scFv και Fab αντισωμάτων μη ικανοποιητικής ανοσοσυγγένειας και ειδικότητας. Παράλληλα επιλέχθηκαν δύο βιβλιοθήκες ανθρώπινων αντισωμάτων (η μία ήταν παρθενική από υγιείς δότες και η άλλη από καρκινοπαθείς) με το 100μερές MUC1 και στην πρώτη περίπτωση απομονώθηκαν ανθρώπινα scFv αντισώματα ειδικά για τη VNTR περιοχή της MUC1 βλεννίνης. Η ειδικότητα τους επιβεβαιώθηκε με την ανοσοενζυμική μέθοδο (ELISA), τον βιοανιχνευτή BIAcore, την κυτταρομετρία ροής και την ανοσοϊστοχημεία. Η ειδικότητα των συγκεκριμένων αντισωμάτων τα καθιστά χρήσιμα εργαλεία για τη διάγνωση αλλά και τη θεραπευτική αντιμετώπιση διαφόρων τύπων καρκίνου που εκφράζουν την υπογλυκοσιλιωμένη μορφή της MUC1 βλεννίνης. Η έκφραση του ανασυνδυασμένου αντι-MUC1 scFv αντισώματος με τη μεγαλύτερη συγγένεια, 10Α, επιχειρήθηκε σε στελέχη Ε. coli που περιείχαν μεταλλαγές σε γονίδια περιπλασμικών πρωτεασών. Σκοπός ήταν να μελετηθεί η επίδραση της πρωτεολυτικής δράσης των περιπλασμικών πρωτεασών στην έκφραση ετερόλογων πρωτεϊνών, όπως τα ανασυνδυασμένα αντισώματα, που μεταφέρονται στον περιπλασμικό χώρο του βακτηρίου για να αναδιπλωθούν. Μελετήθηκαν τέσσερα στελέχη E. coli που περιείχαν διακριτούς συνδυασμούς μεταλλαγών στις βασικές περιπλασμικές πρωτεάσες tsp, protease III, degP και ompT. Οι περισσότερες πρωτεάσες που μελετήθηκαν δεν επηρεάζουν την έκφραση του αντισώματος, εκτός από την ompT που φάνηκε να σχετίζεται με την παρουσία ενός πρωτεολυτικού προϊόντος. Επίσης η παρουσία πολλών μεταλλαγών σε γονίδια πρωτεασών οδήγησε στην συσσώρευση μη λειτουργικού αντισώματος. Η κατανόηση της επίδρασης των περιπλασμικών πρωτεασών στην διαδικασία της έκφρασης αντισωμάτων στα βακτήρια θα επιτρέψει το σχεδιασμό στελεχών E. coli που παρουσιάζουν βελτίωση στην έκφραση λειτουργικών αντισωμάτων.
Ημερομηνία έκδοσης 2001-01-01
Ημερομηνία διάθεσης 2001-02-05
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Επιστημών Υγείας--Τμήμα Ιατρικής--Διδακτορικές διατριβές
  Τύπος Εργασίας--Διδακτορικές διατριβές
Εμφανίσεις 63

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Προβολή Εγγράφου
Εμφανίσεις : 10