Your browser does not support JavaScript!

Αρχική    Σύγκριση πρωτεώματος ευαίσθητων και ανθεκτικών σε αντιβιοτικά επιλογής,στελεχών Βρουκέλλας και γονιδίων -στόχων τους  

Αποτελέσματα - Λεπτομέρειες

Προσθήκη στο καλάθι
[Προσθήκη στο καλάθι]
Κωδικός Πόρου 000377063
Τίτλος Σύγκριση πρωτεώματος ευαίσθητων και ανθεκτικών σε αντιβιοτικά επιλογής,στελεχών Βρουκέλλας και γονιδίων -στόχων τους
Άλλος τίτλος Comparative proteomics of susceptible and resistant in drugs of choice ,brucella strains and study of their target-genes
Συγγραφέας Σανδαλάκης, Βασίλειος
Σύμβουλος διατριβής Γκίκας, Αχιλλέας
Μέλος κριτικής επιτροπής Σαμώνης, Γεώργιος
Τσιώτης, Γεώργιος
Ψαρουλάκη, Αννα
Γανωτάκης, Δημήτριος
Αντωνίου, Μαρία
Σκούλικα, Ευσταθία
Περίληψη Σύγκριση πρωτεώματος ευαίσθητων και ανθεκτικών, σε αντιβιοτικά επιλογής, στελεχών Βρουκέλλας και γονιδίων-στόχων τους Μεθοδολογία Στην παρούσα μελέτη δημιουργήθηκαν in vitro ανθεκτικά στελέχη βρουκέλλας στα αντιβιοτικά εκλογής, δοξυκυκλίνη, ριφαμπικίνη και στρεπτομυκίνη. Ελέγχθηκε πιθανή διασταυρούμενη ανθεκτικότητα σε αντιβιοτικά που χρησιμοποιούνται για την θεραπεία της νόσου με E-test. Πραγματοποιήθηκε πολλαπλασιασμός των γονιδίων που είναι γνωστό πως εμπλέκονται στην αντοχή των χρησιμοποιούμενων αντιβιοτικών. Η πρωτεωμική ανάλυση έγινε με μια gel-free shotgun comparative proteomics τεχνική. Τα αποτελέσματα της συγκριτικής πρωτεωμικής αναλύθηκαν με μεθόδους βιοπληροφορικής με την χρήση λογισμικών που διατίθενται ελεύθερα στο διαδίκτυο. Με την ολοκλήρωση των διαδικασιών τα ανθεκτικά στελέχη αδρανοποιήθηκαν και καταστράφηκαν. Αποτελέσματα-Συζήτηση Δημιουργήθηκαν ειδικοί εναρκτές για τον πολλαπλασιασμό των γονιδίων στόχων των αντιβιοτικών της μελέτης. Συγκεκριμένα τα γονίδια που ελέγχθηκαν με την διαδικασία PCR-Sequencing είναι τα rpsL, rpoB, bepC και 16SrRNA. Κατά την ανάλυση των γονιδίων εντοπίστηκε μετάλλαξη μόνο στο γονίδιο rpoB. Το ανθεκτικό στην ριφαμπικίνη είχε MIC 128μg/ml, το ανθεκτικό στην δοξυκυκλίνη είχε 2,4μg/ml και για το ανθεκτικό στην στρεπτομυκίνη η MIC ήταν 4.096μg/ml. Κατά τον έλεγχο της διασταυρούμενης ανθεκτικότητας με αντιβιοτικά άλλων ομάδων βρέθηκε ότι η αντοχή στην ριφαμπικίνη προκάλεσε αύξηση της MIC στην τριμεθοπρίμη/σουλφαμεθοξαζόλη, η αντοχή στην δοξυκυκλίνη επηρέασε όλες σχεδόν τις ομάδες αντιβιοτικών και η αντοχή στην στρεπτομυκίνη επηρέασε την ριφαμπικίνη. Στην βρουκέλλα η αντοχή στην δοξυκυκλίνη σχετίζεται με την παρεμπόδιση της εισόδου του αντιβιοτικού στο ενδοκυττάριο περιβάλλον και τον περιορισμό όλων των δραστηριοτήτων του μικροοργανισμού. Η αντοχή στην ριφαμπικίνη δεν είναι το αποτέλεσμα μόνο των μεταλλάξεων στο γονίδιο rpoB. Η αντοχή σε αυτό το αντιβιοτικό είναι το τελικό αποτέλεσμα πολλών μεταβολικών διεργασιών του μικροβίου. Η σύγκριση των διαφορετικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών των δυο ομάδων ανάλυσης υπέδειξε 10 πρωτεΐνες οι οποίες είχαν σημαντική αλλαγή στα επίπεδα έκφρασης τους και στις 2 συνθήκες επίδρασης αντιβιοτικού (Δοξυκυκλίνη, Ριφαμπικίνη). Στα τελικά αποτελέσματα προστίθενται 180 πρωτεΐνες που εντοπίζονται πρώτη φορά πειραματικά και αναδεικνύονται 109 πρωτεΐνες που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν σε διαγνωστικές μεθόδους, εμβόλια και ως φαρμακευτικοί στόχοι. Vassilios Sandalakis PhD Thesis Summary Comparative Proteomics of susceptible and resistant, in drugs of choice, brucella strains and study of their target-genes Methodology In the present study we created resistant strains of Brucella abortus were created in vitro for the antibiotics doxycycline, rifampicin and streptomycin. Possible instances of cross-resistance to other antibiotics was also tested. Genes known to be involved in these antibiotics resistance were amplified and analysed. The proteomics study was performed using a gel-free shotgun comparative proteomics approach. The proteomics study results were analysed using bioinformatics methods with online software. After completion of the experiments all resistant strains were destroyed. Results - Discussion Specific primers were designed for the amplification of the target genes of this study. The genes examined by PCR-Sequencing are rpsL, rpoB, bepC και 16SrRNA. There was only one mutation detected in the rpoB gene. The rifampicin resistant strain had an MIC of 128Kg/ml, the doxycycline resistant revealed an MIC of 2,4Kg/ml and the MIC for the streptomycin resistant strain was 4.096ug/ml. Cross-resistance testing showed that rifampicin resistance elevates the MIC levels of trimethoprim/sulfamethoxazole. Doxycycline resistance affects almost all other groups of antibiotics and streptomycin resistance affected mostly the MIC of rifampicin. In brucella doxycycline resistance is related to the blocking of the drug entry within the cell and the restriction of all of the cells metabolic activities Resistance in rifampicin is not only a result of mutations in the rpoB gene. Reduced susceptibility in this antibiotic is the end result of many altered metabolic processes. The comparison of the differentially expressed proteins of the two datasets revealed 10 common proteins that alter their expression levels in both instances of resistance (Doxycycline, Rifampicin). Finally a further 180 proteins were added to the list of the experimentally detected proteins and 109 proteins have been described as worthy to investigate for possible use in diagnosis, vaccines and/or as drug targets
Φυσική περιγραφή 244 σ : πιν. ; 30 εκ.
Γλώσσα Ελληνικά
Θέμα Brucella
Doxycycline
Mic
Mutations
Proteomics
Rifampicin
Streptomycin
resistance
Αντοχή
Βρουκέλλα
Δοξυκυκλίνη
Μεταλλάξεις
Πρωτεωμίκη
Ριφαμπικίνη
Στρεπτομυκίνη
Ημερομηνία έκδοσης 2012-07-24
Συλλογή   Σχολή/Τμήμα--Σχολή Επιστημών Υγείας--Τμήμα Ιατρικής--Διδακτορικές διατριβές
  Τύπος Εργασίας--Διδακτορικές διατριβές
Εμφανίσεις 131

Ψηφιακά τεκμήρια
No preview available

Δεν έχετε δικαιώματα για να δείτε το έγγραφο.